主题：【悬赏帖】新手求助！！！GPC220，测试过程中遇到不可理解的问题，样品有时候能分开，有时候分不开。

原文由 小不董(doxw0323) 发表:
样品中加入溴化锂和体系里加溴化锂还是有区别的，你只用了一根柱子？从你最后一张图看，有点怀疑你样品中加入溴化锂后峰是溴化锂的信号峰。
你用流动相做样品，加入20mm的溴化锂看看其色谱峰呢。
另标准样品的峰形如何，有加入更高的溴化锂色谱峰吗？
还有DMF体系很容易吸水，溴化锂也容易吸潮，若体系里含有过多的水分，做起来就很痛苦。你可以测定下体系流动相中的水分含量。

原文由 dfsftretf(v3112396) 发表:
你可以测定下体系流动相中的水分含量。

原文由 shamy(v3112183) 发表:
非常感谢你的关注和回答。
我用的UV检测器，只有一根柱子，设定的波长是420nm，是我的样品的吸收波长，所以可能不是溴化锂的峰吧。
我的整个体系的溶剂已经含有20mM 的溴化锂了，之所以用20mM是因为，在样品瓶里面加溴化锂可以得到比较好看的峰形（从5 mM逐渐经过10 mM--- 15 mM 加到20 mM的）。
每次在样品瓶加的比体系里面多一些溴化锂的话，信号就好好看很多，但是把整个体系溴化锂浓度增大后，却又得不到好的结果了，然后再加多在样品瓶又发现会变好，然后体系都增加溴化锂浓度后又不行了。。。一路过来都是这样，得到的结果不合理而且无法解释。。。
当然这个结果只是对含有很多OH的样品，我的其他样品（不含OH，含有acetyl保护基团的）都是没问题的。
我会按照您的建议再试一下，然后再给你看一下结果。
希望你可以再帮我分析下原因。
非常感谢！

原文由 峰0310(v3119261) 发表:
能不能问一下你配的样品浓度是多少啊？

我现在在做P4VP聚乙烯基吡啶，用DMF相的GPC做的测试，55℃的柱温，流动相应该是含有0.1%溴化锂的DMF。第一次测的时候，得到的是很完整的单峰，但是之后测的都是奇奇怪怪的峰形，双峰拖尾什么情况都有。。配样的用的就是0.1%溴化锂的DMF，非常郁闷。

然后因为我是要做嵌段嘛，接了第二段的时候，也是第一次做GPC的结果也是非常好看，我就觉得是第二段屏蔽掉了PVP里面吡啶与柱子的相互作用，所以峰形变好。但是之后测的结果又开始奇怪了。

我也试了改变溴化锂的浓度，用0.5%溴化锂的DMF去配2mg/ml的样品，做出来的P4VP的结果还是非常奇怪。

现在是异常郁闷，因为用的是ATRP做的反应，不应该出来这么奇葩的结果的

原文由 shamy(v3112183) 发表:
我用的浓度是根据聚合单元的浓度，是5*10e-5 mol / L, 聚合单元分子量约在1700. 我用的LiBr的浓度已经到了20 mmol / L了，算起来已经是大大的超过样品的浓度了，应该足够消除polymer之间的相互作用。
我跟你一样的情况，就是刚开始的结果很好，但是后面测试就不行了，重复不出之前的好结果，非常郁闷。老板非说是我的问题，认为我中间配流动相的时候可能出错了。然后我就重新换到低浓度LiBr，然后逐渐增加到20 mM了，可是还是没有解决问题。。。不可思议。。。。。

原文由 峰0310(v3119261) 发表:
稍微算了一下你的样品浓度，浓度好低啊。。
我看到你最上面放出来的10mM-200mM LiBr in vial的那个图，峰形还不错的，流动相的LiBr浓度大概在多少啊？
因为我也在摸索测试条件。。看了很多帖子，也查了一些文献，发现做DMF相的GPC要做好实在太难了，尤其是聚合物上有大量的极性基团的。。我觉得你还好啊，自己组里面就有GPC可以自己改变流动相条件这些，我都要送到学校的测试平台去做，那边的测试条件又给定了，我只能自己想办法去解决。。我是看到你改变配样的DMF中的LiBr的浓度，峰形会变好，所以感觉可以尝试一下

原文由 shamy(v3112183)发表:

原文由  峰0310(v3119261) 发表:
稍微算了一下你的样品浓度，浓度好低啊。。
我看到你最上面放出来的10mM-200mM LiBr in vial的那个图，峰形还不错的，流动相的LiBr浓度大概在多少啊？
因为我也在摸索测试条件。。看了很多帖子，也查了一些文献，发现做DMF相的GPC要做好实在太难了，尤其是聚合物上有大量的极性基团的。。我觉得你还好啊，自己组里面就有GPC可以自己改变流动相条件这些，我都要送到学校的测试平台去做，那边的测试条件又给定了，我只能自己想办法去解决。。我是看到你改变配样的DMF中的LiBr的浓度，峰形会变好，所以感觉可以尝试一下

确实，如果送到学校做，他们固定了测试条件的话，不好调节。你可以看看其他学校的机器有没有合适你的样品的测试条件的。
而我，就是看到在样品瓶中多加一些LiBr会使得峰形变好，才开始在整个流动相里面多加LiBr的。我的困惑点就是，比如，单纯的在样品瓶加到20 mM的浓度的LiBr，峰形会非常好看，但是我把流动相也换成含有20 mM的LiBr的时候，就得不到好的峰了。。。。。。。
还有就是，就是我的打进去的样品的浓度是一样的（因为我是从一个比较高浓度的稀释的每一个样品瓶的），当在瓶子里加不同量的LiBr的时候，得到的峰的信噪比非常不同，具体就是瓶子里的LiBr的浓度越高，信号越强，信噪比越好，非常的困惑。。。。。。。。。