主题：【原创】应用ringbio纤维分析仪测定饲料中中性洗涤纤维

1 范围
本方法规定了饲料中饲料中中性洗涤纤维(NDF) 的测定方法。
本方法适用于各种单一饲料和配合饲料。
本方法不适用于无机盐类饲料添加剂。
2 原理
饲料如一般饲料、牧草和粗纤维在一定温度下，经中性洗涤剂处理，可洗涤分解大部分细胞内容物，如脂肪、淀粉、蛋白质和糖类等，不溶解的残渣为中性洗涤纤维（NDF），包括构成细胞壁的半纤维素、纤维素、木质素和少量硅酸盐等杂质。
3 仪器和设备
3.1 消化装置- Ringbio 纤维分析仪。
3.2 滤袋- Ringbio 专用滤袋。
3.3 封口机。
3.4 电热干燥箱。
3.5 高温电阻炉。
3.6 耐溶剂记号笔。
3.7 干燥器：无水氯化钙或变色硅胶为干燥剂。
3.8 分析天平- 精确至0.1 mg。
4 试剂和溶液
4.1 十二烷基硫酸钠。
4.2 乙二胺四乙酸二钠（EDTA 二钠盐）。
4.3 四硼酸钠（Na₂B₄O₇·10H₂O）。
4.4 无水磷酸氢二钠。
4.5 三甘醇。
4.6 正辛醇（消泡剂）。
4.7 丙酮。
4.8 α-高温淀粉酶。
4.9 中性洗涤剂（3％十二烷基硫酸钠溶液）：称取60.0 g 十二烷基硫酸钠（USP）；37.22 g 乙二胺四乙酸二钠（Na₂EDTA）；13.62 g 四硼酸钠（Na₂B4O₇）十水；9.12 g 无水磷酸氢二钠（Na₂HPO₄）；20.0 ml 三甘醇；全部溶解在2 L 水中，适当的搅拌和加热有助于溶解。检查适当的pH 在6.9～7.1。
5 测定步骤
5.1 试样
用耐溶剂记号笔给滤袋编号，称重记为m₁。准确称取0.5 (± 0.05) g 制备好的样品于滤袋中，记为m。样品需要粉碎过1mm 筛。在距离滤袋上边缘约4mm 处用封口机封口，将样品在滤袋中展平，均匀分布。
至少取一个空滤袋作为空白，记为C，做空白测定。
5.2 预先脱脂
脂肪含量高的样品需要脱脂。将装有样品的滤袋放入玻璃容器中，加丙酮使滤袋完全浸没，浸泡10min，倒掉溶剂，将滤袋放在网筛上凉干。
5.3 放置滤袋
将样品袋放在托盘上，每层托盘可放三个。一次最多可以在滤袋架上放24个滤袋。无论放置滤袋数量多少，8 层滤袋架上的托盘要全部使用，层与层之间错开120°。然后将装有滤袋的支架放入纤维分析仪消煮器中，将金属压锤放在支架顶部，以确保消煮过程中不浮起。
5.4 消煮
当处理24 个样品袋时，在消煮缸体内加入1900～2000 mL 已配好的中性洗涤剂溶液。如果处理的样品袋少于20 个，按照每个滤袋加100 mL 溶液，但不能少于1500 mL，要确保滤袋托盘能完全浸没。再向消煮缸体内加入20.0 g 无水亚硫酸钠和4.0 g α-高温淀粉酶。按下HEAT+AGITATE按键，设置处理时间75 min，确保滤袋支架搅拌正常。盖上盖子并完全密封好。仪器将加热并维持溶液温度100 °C。
5.5 排废
时间到后加热搅拌自动关停，消煮结束，按下EXHAUST按键，排出废液。
*注：消煮器中的溶液是有压力的，在打开盖子之前一定将废液全部排尽以释放压力。
5.6 水洗
溶液排尽后，打开盖子，加2L (70°C~90°C) 的蒸馏水，并且第1次和第2次淋洗时同时加4.0 g α-高温淀粉酶，放下盖子，但不旋紧。按下FLUSH 按键，设置时间为5 min。重复2 次，共淋洗3 次。最后一次淋洗后，加冷的自来水以操作和使冷却容器，为下轮测定做好准备。
5.7 浸泡丙酮
将滤袋从滤袋支架上取下来，轻轻挤压去掉多余的水。然后将滤袋放入250 mL 烧杯中，加丙酮至浸没滤袋，浸泡3~5 min 后，取出并轻轻挤压去掉多余的丙酮。
5.8 烘干并称重
在通风橱中展开滤袋，让其自然干燥。完全干燥后放入102 °C±2 °C 烘箱中烘干2～4 h。
*注：为避免滤袋燃烧，在丙酮完全挥发前不能把滤袋放入烘箱中。
从烘箱中取出滤袋，直接放入干燥器中冷却至室温，称重记为m₂。
6 结果计算
试样中中性洗涤纤维质量分数按以下公式计算：
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其中：
m₁——空滤袋质量，g；
m——样品质量，g；
m₂——提取处理后样品残渣质量+滤袋质量，g；
C——为空白滤袋校正系数(烘干后质量/原来质量)。
7 安全注意
7.1 丙酮易燃，操作时应在通风橱中进行，避免吸入或与皮肤接触。将滤袋放入烘箱之前，要确保滤袋完全干燥，丙酮完全挥发。
7.2 十二烷基硫酸钠对黏膜有刺激，因此操作时要带防尘口罩和手套。