主题：【第十届原创】卫生纸中细菌菌落总数的测量不确定度评定

卫生纸中细菌菌落总数的测量不确定度评定

贾 亮

山西省产品质量监督检验研究院山西太原030012

1 引言

测量不确定度是与测量结果相关联的参数，用以表征合理赋予被测量值的分散性。本文适用于卫生纸中细菌菌落总数的测量不确定度的评定，这里的卫生纸是采用标准GB 20810-2006《卫生纸（含卫生纸原纸）》生产的产品。

2 测量参数概述

主要仪器：电子天平（220g）、量筒（250mL）、移液器(1mL)、恒温培养箱。

参数：细菌菌落总数。

3 原理及方法

依据GB 20810-2006《卫生纸（含卫生纸原纸）》中附录A.3.1细菌菌落总数的检测进行卫生纸中的细菌菌落总数的检验。在超静工作台上用无菌方法开启4个小包装，从中称量样品10g，剪碎后加入到200mL灭菌生理盐水中，充分混匀，得到一个生理盐水样液。待上述样液自然沉降后取上清液做菌落计数。共接种5个平皿，每个平皿中加入1mL样液，然后用冷却至45℃左右熔化的营养琼脂20mL，倒入平皿中，充分混匀。待琼脂凝固后翻转平皿，置36℃培养温箱内培养48 h。然后计算平皿上的细菌菌落数目。

5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数A，稀释度为，卫生纸中的细菌菌落总数X按下式计算：

X=A

式中：X----细菌菌落总数，单位为CFU/g；

A----5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数, 单位为CFU/g；

----稀释度，此处稀释度为20。

4 结果与讨论

4.1测量不确定度的来源

依据前述卫生纸中细菌菌落总数的检测原理及测量模型，结合检测经验，分析卫生纸中细菌菌落总数的测量不确定度来源主要有：

4.1.1由卫生纸中细菌菌落总数测量的重复性引入的不确定度。

4.1.2由天平称量时引入的不确定度。

4.1.3由量筒量取生理盐水时引入的不确定度。

4.1.4由移液器移取样液时引入的不确定度。

以上不确定度来源，第一种来源可以用Ａ类不确定度评定，后三种来源可用B类不确定度评定。

4.2测量不确定度评定

4.2.1 A类不确定度评定

卫生纸在检测细菌菌落总数时，每个试样需要检测5份，计算其平均值后报出细菌菌落总数。本次报告中，由同一人员对15个样品进行重复性检测。用菌落总数的平均值直接计算标准偏差，因其数据的发散性较大，计算出的样本标准差会很大，不符合正态分布规律，所以对检验结果取其对数，然后计算出样本检验结果对数值的均值和重复性标准偏差，其数据处理过程见下表1：

检验结果对数值平均值： =2.74

检验结果对数值的重复性标准偏差为：

S= =0.058

检验结果对数值平均值的重复性标准偏差为：

S‘= S/ =0.0151

表1： 卫生纸中细菌菌落总数检测结果

4.2.2 B类不确定度评定

样品初始液制备过程时，使用220g的电子天平称取10g的样品，加入到用250mL量筒量取的200mL灭菌生理盐水中。根据JJG 1036-2008《电子天平》和JJG196-2006《常用玻璃量器》，220g电子天平最大允许误差为0.0001g， 250mL量筒的容量允许差为1.0mL，按均匀分布处理，其标准不确定度分别为 0.0001/=0.00058g、1.0/=0.58mL。初始液向平皿转移过程中，使用1mL移液器量取1mL初始液至平皿中，根据JJG646-2006《移液器》其容量允许差分别为0.015mL，按均匀分布处理，其标准不确定度分别为0.015/=0.0087mL。

稀释过程中相对标准不确定度：

u_B=1/2 =0.0100

4.3 合成不确定度

合成相对标准不确定度：u _cr= ［0.01512+ 0.01002  ］1/2=0.10

合成标准不确定度：u _C=2.74×0.10= 0.27

4.4测量不确定度报告

为保证置信概率达95%，取包含因子k=2，扩展不确定度为：U=ku_C=2×0.27=0.54。依据RB/T151-2016《食品微生物定量检测的测量不确定度评估指南》规定，本次测量结果报告为：（2.74 log10±0.54 log10）CFU/g（包含因子k=2），转换成自然值取整数为200 CFU/g ~ 1900CFU/g（包含因子k=2）。

5 结论

影响卫生纸中细菌菌落总数的测量不确定度的因素比较多，除上述不确度来源外，还有培养基试剂、样品、次级取样、基质、随机误差等方面的来源，但它们对合成标准不确定度的贡献较少，所以本文主要对4.1中提到的不确定度来源进行分析。经过上述结果与讨论可以得出，重复性不确定度产生的主要原因是试验操作，因此在平常检验过程中要注意人员操作的规范性。