1.原理
试样经无水乙醇超声提取，采用高效液相色谱仪测定，保留时间定性，峰面积外标法定量。实验方法参考张艳达等食品中对羟基苯甲酸酯类的检测-高效液相色谱法（CumulativetyNO.272）
材料与方法
2.1仪器设备与耗材
高效液相色谱仪：配紫外检测器、0.45μm滤膜，有机系、分析天平：感量为0.0001g 、氮吹仪、组织捣碎机、超声波发生器。
2.2试剂
乙腈：色谱纯、甲醇：色谱纯、乙醇：分析纯。
对羟基苯甲酸甲酯（1000.0μg/mL）标品。
对羟基苯甲酸乙酯（1000.0μg/mL）标品。
对羟基苯甲酸丙酯（1000.0μg/mL）标品。
试样提取
3.1固体试样：
准确称取样品5g（精确至0.01g），置于50mL比色管中，加入25mL无水乙醇，置超声波水浴中提取10min，取出4000r/min离心10min，上清液转入50mL容量瓶中，残渣再用20mL无水乙醇重复提取一次，合并上清液，用无水乙醇定容至刻度，过0.45μm滤膜过滤。供液相色谱分析。
3.2液体试样：
准确称取样品5g（精确至0.01g），置于50mL比色管中，加入25mL无水乙醇，置超声波水浴中提取10min，取出等冷却至室温时用无水乙醇定容至刻度，过0.45μm滤膜过滤。供液相色谱分析。
3.3 色谱条件：
3.3.1色谱柱：C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm；
3.3.2流动相：水：乙腈=45:55
3.3.3流速：1mL/min ；
3.3.4检测波长：254nm；
3.3.5进样体积20μL。
3.3.6柱温：25℃
3.4外标法计算公式：

式中：C-由标准曲线所得样品溶液各组分浓度，μg/ mL；
V-定容体积,mL；m-称样质量g；f-稀释倍数。
两次测试结果的相对误差小于10%即为测试平行
4实验结果
4.1外标法标准曲线线性的确定
分别精确吸取对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯1000.0μg/mL的标准储备液5.0μL、12.5μL、25.0μL、40.0μL、50.0μL、125.0μL 、250.0μL于5 0mL容量瓶中，用无水乙醇配制成0.1、0.25 、0.5、0.8、1.0 、2.5 、5.0μg/mL标准溶液，按照上述已确定的色谱条件，进样20μL，测定对羟基苯甲酸酯类浓度与峰面积的相关性，确定相关系数及线性范围，标准曲线见图1。可见，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯在0.1_~5.0μg/mL范围内，含量与色谱峰面积呈显著的线性关系，可满足定量分析的需要。
对羟基苯甲酸甲酯：Y=73446.0X-3284.05 R2=0.9994227

对羟基苯甲酸乙酯：Y=120633X-637.664 R2=0.9998993

对羟基苯甲酸丙酯：Y=101679X+626.935 R2=0.9996277

图1 对羟基苯甲酸酯类标准曲线图
4.2检出限
取0.8μg/mL和1.0μg/mL标准溶液梯度稀释进样，至S/N=3±1，确定出对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸乙酯检出限为0.08μg/mL，对羟基苯甲酸丙酯检出限为0.1μg/mL。
即本方法的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸乙酯检出限为0.8mg/kg，
对羟基苯甲酸丙酯检出限为1.0mg/kg。
3.3加标回收及重复性
对样品进行加标回收实验，加标浓度设0.5μg/mL、0.8μg/mL、1.2μg/mL，回收率结果见表1，可见对样品进行三个浓度的加标回收率在90%_~112%之间。称取6个样品，分别对其进行5.0μg/mL加标，做准确度实验，重复性实验结果见表2，结果可见，对羟基苯甲酸酯类的平均回收率在98.0%~105%之间，RSD为对羟基苯甲酸甲酯2.44%、对羟基苯甲酸乙酯1.13%、对羟基苯甲酸丙酯0.49%由表1和表2结果表明本实验方法能够满足分析要求。

表1对羟基苯甲酸酯类加标回收率结果