主题：【讨论】分流进样的重复性问题

原文由 diamond 发表:
用的是varian 3800，分流比40：1，发现同一个样品同一根针同一个人（就是我）在同样的仪器条件下进样，有时峰面积会相差一倍。用的是内标法，平行样的结果还过得去。已经排除手动进样和漏气等问题，但是对于峰面积（比如内标异丁醇）如此大的变化有点不能理解，到底是仪器问题还是什么问题呢？

另外由于做的样品比较脏，容易污染衬管，不知道会不会有这个影响？

分流是成线性的吗？每次分出的样品都是同样的多吗？应该不是．如果用风流做外/标我认为不妥啊．个人观点，供参考

分流有歧视或是误差这是无法避免的，但是相差一倍似乎无法用这些理由来解释吧。

原文由 diamond 发表:
用的是varian 3800，分流比40：1，发现同一个样品同一根针同一个人（就是我）在同样的仪器条件下进样，有时峰面积会相差一倍。用的是内标法，平行样的结果还过得去。已经排除手动进样和漏气等问题，但是对于峰面积（比如内标异丁醇）如此大的变化有点不能理解，到底是仪器问题还是什么问题呢？

另外由于做的样品比较脏，容易污染衬管，不知道会不会有这个影响？

不干净的衬管的确会有这样的影响，但是分流进样的确会有这样的问题。我觉得还有就是和手动进样有一定关系，面积是整整差一半么？还是偶尔呢？

有几个问题：
1 标样也是这样么？

2 样品中各组分沸点相差有多大？

3 进样针是什么样的，多少uL的？

原文由 lqqer 发表:
不干净的衬管的确会有这样的影响，但是分流进样的确会有这样的问题。我觉得还有就是和手动进样有一定关系，面积是整整差一半么？还是偶尔呢？

基本上可以算差一半，15万会变成7万多，不是偶尔，总的趋势越打越小。

原文由 guohua 发表:
有几个问题：
1 标样也是这样么？

2 样品中各组分沸点相差有多大？

3 进样针是什么样的，多少uL的？

1、标样我倒是没进过，有机会我试试看

2、最低与最高的沸点差异可能会超过200度。

3、10uL的进样针进1uL。

所谓分流歧视是指在一定分流比条件下，不同样品组分的实际分流比是不同的，这就会造成进入色谱柱的样品组成不同于原来的样品组成，从而影响定是分析的准确度。因此，采用分流进样时必须注意这个问题。那么，是什么因素造成分流歧视的呢？

不均匀汽化是分流歧视的上要原因之一，即由于样品中各组分的极性不同，沸点各异，因而汽化速度各不相同。理论上讲，只要汽化温度足够高，就能使样品的全部组分迅速汽化。只要汽化室内样品处于均相气体状态，分流歧视就是可以忽略的。然而，实际上样品在汽化室是处于一种运动状态，即必须随载气流动。从汽化室汽化到进入色谱柱的时间很短(以秒计)，沸点不同的组分到达分流点时，汽化状态可能不完全相同。这样，由于分流流最远大于柱内流量，汽化不太完全的组分就比完全汽化的组分可能多分流掉一些样品。造成分流歧视的另外一个原因是不同样品组分在载气中的扩散速度不同。而扩散速度与温度是成正比的。所以。尽量使样品快速汽化是消除分流歧视的重要措施，包括采用较高的汽化温度，也包括使用合适的衬管。

分流比的大小也会影响分流歧视口一般地讲，分流比越大，越有可能造成分流歧视口所以，在样品浓度和柱容量允许的条件下，分流比小一些有利。至于分流比的测定定是很简单的，只要在分流出口用皂膜流量计测定分流流量，再测定柱内流量(因为柱内流量很小，用皂膜流量计测定时误差较大，故常用测定死时间的办法进行流量计算)。二者之比即为分流比。严格地讲，两个流量值应校正到相同的温度和压力条件下，才能获得准确的分流比。实际工作中人们更关心的是分流比的重现性，分流比则常用整数之比表示，故一般不需要很准确地测定。

具体分析中要消除分流歧视，还应注意色谱柱的初始温度尽可能高一些。这样，汽化温度和柱箱温度之差就会小一些，因而样品在汽化室经历的温度梯度就会小一些，可避免汽化后的样品发生部分冷凝。最后一个问题是色谱柱的安装，一是要保证柱入口端超过了分流点。二是保证柱入口端处于汽化室衬管的中央，即汽化室内色谱柱与衬管是同轴的(参看上一章有关色谱柱安装的内容)。

尽管分流进样有歧视间题，但它仍然是毛细管GC中最常用的进样方式。在实际工作中。分流歧视是很难完全消除的，但只要操作是重现的，一定程度的歧视是重现的。就可以通过标准样品的校准来消除歧视效应对定量精度的影响

另一方面。由于分流进样给检测灵敏度提出了更高的要求，而当样品浓度太低时。分流进样并不总是合适的选择。除了进行样品预处理(如浓缩)外。读者很容易想到不分流进样。既然分流进样是因为柱容量小、样品浓度高而不得不采用的方法。那么低浓度样品采用不分流进样，以提高检测灵敏度就是理所当然的选择了。

同问．
我也有遇到这样的问题的．以前怀疑是仪器的问题．但是那峰面积降低后，又会升高的．这是我进样精密度差的主要原因．
楼上那些理论，我也有看过，但是好象对于操作没有太大的指导意义．能有更实际的建议么？？？

减少进样体积，比如你进的是１微升，现在改为进0.5微升，再看平行性

呵呵，我也发现同样问题。定量用内标还好些，但不管是人工进样还是自动进样，同样的样品，峰面积相差50%常事，郁闷呢。