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在检测行业中大家对衍生并不陌生,我们通过衍生反映的场所可以将衍生化反应分为柱前衍生、柱上衍生和柱后衍生三种,另外还可以通过是否与仪器一起使用分为在线衍生、离线衍生和旁线(自动化)衍生。目前在高效
液相色谱中使用最多的是离线柱前衍生法(下文简称柱前衍生)和在线柱后衍生法(下文简称柱后衍生)。
柱前衍生简而言之就是在先通过衍生化反应,得到衍生化产物,然后再进入色谱柱进行分离检测。这种衍生方法具有反应速率和反应条件相对自由、不受限制,不需要很复杂的仪器设备,衍生剂选择种类较多等优点,同时它也有操作步骤繁琐,稍有不慎就会影响定量的准确性,在反应过程中会产生衍生副产物,无法进行预处理的会给色谱分离带来较大的困难。且在进行衍生化反应时容易出现杂质,导致出现干扰峰。
柱后衍生呢就是先将样品在色谱柱上进行分离,样品组分经分离后从色谱柱中流出,在特定的条件下进行衍生化反应,是待测样品中的组分可以被检测器检出。它的优点是没有其他物质引入,影响检测的因素较少,重现性好。它的缺点呢是需要安装额外的仪器设备,因流动相流速和管路长度的限制,对反映的速率和时间要求相对严格。柱后衍生在氨基甲酸酯类农药残留、食品中牛磺酸和黄曲霉毒素含量以及伏格列波糖的检测中运用最多。
我们在检测黄曲霉毒素含量是通常使用HX-G柱后光化学衍生系统,对黄曲霉毒素B1和G1的荧光强度进行增强。在此衍生过程中不需要使用化学药品,有效的避免了实验人员接触有毒物质。没有腐蚀性的试剂流经毛细管道,不会对
液相色谱仪造成伤害,且操作起来比电化学和溴/碘衍生简单,结果也优于电化学和溴/碘衍生。
在检测氨基甲酸酯类农药残留时,采用了HX-2000二级柱后衍生系统,氨基甲酸酯类化合物与氢氧化钠进行水解反应后,产生的甲胺与邻苯二甲醛和2-疏基丙酸通过反应生成一种异吲哚产物,在荧光检测器下进行定量。此方法分析的速度快,分离能力较强,检测灵敏度较高。
这些是我们在实验中涉及到的衍生化系统及反应,请大家多多指导。