主题:【已应助】关于液相测氨基酸的问题

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cfgong
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用的是Venusil-AA氨基酸分析法测定鱼肉中的氨基酸
标样出的色谱图很好
样品出峰很少而且很小,加大浓度后还是不行
怀疑是样品水解过程中出了问题
我的水解方法:0.2g左右的鱼干粉加入5mL6mol/L的盐酸,抽真空后封口,110度
水解24h
想请问做过的朋友,我的水解过程有没有问题?再有就是水解后是什么颜色的?我的呈棕色,发现我处理的标品在放置一天后,颜色由无色变成了黄色,是不是我的样品中的氨基酸在水解的过程中已被氧化了?
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cfgong
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我用的不是方法包,直接用PITC衍生,普通的C18色谱柱。一般衍生是比较稳定的,PITC衍生产物比其他衍生又稳定些,但是建议现做先衍生(一般都要求这样),不要超过1d,否则衍生物不稳定。
问题我怀疑还是出现在水解这一块。建议注意一下几个方面
1、水解过程中注意充氮气,快速封口,做好保护
2、用混合氨基酸做水解对比,来验证水解对氨基酸的影响,
3、你是直接用水解样衍生的,这样不妥。应该浓缩一下,还有样品的PH对后续衍生会影响。(建议对水解后的样品做相应的处理,我认为这是关键)
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