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主题：【已应助】关于液相测氨基酸的问题

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cfgong
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发表于：2019/12/13 10:37:30 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用的是Venusil-AA氨基酸分析法测定鱼肉中的氨基酸
标样出的色谱图很好
样品出峰很少而且很小，加大浓度后还是不行
怀疑是样品水解过程中出了问题
我的水解方法：0.2g左右的鱼干粉加入5mL6mol/L的盐酸，抽真空后封口，110度
水解24h
想请问做过的朋友，我的水解过程有没有问题?再有就是水解后是什么颜色的?我的呈棕色，发现我处理的标品在放置一天后，颜色由无色变成了黄色，是不是我的样品中的氨基酸在水解的过程中已被氧化了？
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2019/12/13 10:38:04 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我用的不是方法包，直接用PITC衍生，普通的C18色谱柱。一般衍生是比较稳定的，PITC衍生产物比其他衍生又稳定些，但是建议现做先衍生（一般都要求这样），不要超过1d，否则衍生物不稳定。
问题我怀疑还是出现在水解这一块。建议注意一下几个方面
1、水解过程中注意充氮气，快速封口，做好保护
2、用混合氨基酸做水解对比，来验证水解对氨基酸的影响，
3、你是直接用水解样衍生的，这样不妥。应该浓缩一下，还有样品的PH对后续衍生会影响。（建议对水解后的样品做相应的处理，我认为这是关键）
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