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影响分离度的因素：
案例
结构式：
和
需分离以上两个位置异构体，并且分离相邻杂质。
原方法参数：
图谱：
需解决问题：两物质分离不完全，并且有杂质干扰。
思考：如何进行优化？
柱效N：柱效较高， L/D=150/2.7=55.6，上升空间小.
选择因子：Bonus RP填料色谱柱，三氟乙酸水溶液及乙腈的流动相体系。
保留因子k：两物质出峰在19min左右，改变梯度对其分离影响较小。
所以只有改变选择因子才能实现分离。
实验设计：
MPA流动相 | 色谱柱 | 结果 |
0.05%TFA | X-Bridge C18 4.6*150mm 5μm | 两主峰未达到基线分离 |
0.05%TFA | X-Bridge phenyl 4.6*150mm 3.5μm | 两主峰未达到基线分离 |
高氯酸盐 | X-Bridge C18 4.6*150mm 5μm | 主峰分离情况较好。 |
优化后参数：
Column | Xbridge C18 4.6*150mm,5μm | ||
Wavelength | 250nm | ||
Column Temperature | 30℃ | ||
Flow | 1.0mL/min | ||
Acquisition Time | 30min | ||
Injection Volumn | 2μL | ||
MP A | 40mM高氯酸铵（4.68g高氯酸铵至1000m水），用磷酸调节pH至2.4 | ||
MP B | ACN | ||
Gradient | Time (min) | MP A(%) | MP B(%) |
0 | 60 | 40 | |
15 | 20 | 80 | |
30 | 20 | 80 | |
柱效N：柱效比原方法低， L/D=150/5=30.
选择因子：XBridge C18填料色谱柱，高氯酸铵，磷酸及乙腈的流动相体系。
保留因子k：两物质出峰在13-15min。
两物质及与其相邻杂质已完全分离。
图谱如下
总结：高氯酸根有打乱氢键作用力的能力，对具有-NH2，-NHR,-OH，-X基团的化合物有意想不到的分离效果。
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