主题:【原创】选择因子的改变对分离度的影响

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viki
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影响分离度的因素





N:柱效,正比于长度,反比于粒径

a选择因子

k保留因子

R:分离度

由上式公式可知选择因子对分离度影响最大

案例

结构式

需分离以上两个位置异构体并且分离相邻杂质

原方法参数

需解决问题:两物质分离不完全,并且有杂质干扰

思考:如何进行优化

柱效N柱效较高 L/D=150/2.7=55.6,上升空间小.

选择因子Bonus RP填料色谱柱三氟乙酸水溶液及乙腈的流动相体系

保留因子k:两物质出峰在19min左右改变梯度对其分离影响较小

所以只有改变选择因子才能实现分离。

实验设计

MPA流动相

色谱柱

结果

0.05%TFA

X-Bridge C18 4.6*150mm 5μm

两主峰未达到基线分离

0.05%TFA

X-Bridge phenyl 4.6*150mm 3.5μm

两主峰未达到基线分离

高氯酸盐

X-Bridge C18 4.6*150mm 5μm

主峰分离情况较好。

优化后参数:

Column

Xbridge C18 4.6*150mm,5μm

Wavelength

250nm

Column Temperature

30

Flow

1.0mL/min

Acquisition Time

30min

Injection Volumn

2μL

MP A

40mM高氯酸铵(4.68g高氯酸铵至1000m水),用磷酸调节pH2.4

MP B

ACN

Gradient

Time (min)

MP A(%)

MP B(%)

0

60

40

15

20

80

30

20

80

柱效N柱效比原方法低 L/D=150/5=30.

选择因子XBridge C18填料色谱柱高氯酸磷酸及乙腈的流动相体系

保留因子k:两物质出峰在13-15min

两物质及与其相邻杂质已完全分离

图谱如下

总结高氯酸根有打乱氢键作用力的能力,对具有-NH2-NHR,-OH-X基团的化合物有意想不到的分离效果


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