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液相色谱（LC）
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主题：【分享】【实战宝典】如何选择氨基酸分析时可以使用的衍生化试剂？

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发表于：2021/03/23 14:23:56 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问题描述：使用液相色谱紫外检测器测定氨基酸，发现使用AQC衍生测定时AMQ峰很高，但是氨基酸的峰很低，此时氨基酸的浓度已经很大，浓度为100mg/kg。降低了AQC的量，基线漂移很严重，有什么方法可以改善？有没有更好的衍生化试剂？

解答：氨基酸的结构决定了本身的紫外吸收很弱，因此用液相色谱-紫外检测器测定氨基酸含量时需要用到衍生试剂，增大其紫外吸收以满足灵敏度要求。用于紫外检测器分析氨基酸的柱前衍生试剂主要包括PTC、PTH和AQC等。

（1）PTH（苯乙内酰硫脲）：PTH是最早一批用于氨基酸衍生的试剂，衍生物稳定，缺点是不能同时衍生所有氨基酸（如Arg、His等需要单独处理），这就导致衍生步骤复杂且时间长，已经逐步被PTC法取代。

（2）PTC（苯氨基硫甲酰）：PTC是PTH衍生法的中间产物，与PTH法相比，该方法衍生步骤简单、快速（室温条件下只需20min），衍生产物稳定，且都能和一、二级氨基酸反应，试剂、副产物等干扰因素可通过快速蒸发去除，紫外检测灵敏度相对较高（可达1pmol），是目前氨基酸柱前衍生分析方法的主要试剂之一。

（3）AQC（6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯）：AQC是一种具有反应活性的杂环氨基甲酸酯，能与一、二级氨基酸反应迅速生成脲。该衍生物性质十分稳定，具有强紫外吸收。该方法使用时要注意AQC的加入量要适当，如果在组氨酸峰后和甘氨酸峰前分别出现一个较小和较大的峰，则可能是AQC量不够，导致含有两个氨基的赖氨酸形成单衍生化的两个异构体。如果色谱柱上出现一个很大的试剂峰而影响目标物检测，则可能是AQC过多水解为AMQ。

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