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主题：【第十四届原创】方法开发案例

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小豹
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R队发表于：2021/08/01 07:52:38 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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手性化合物分离案例分享-小豹





该化合物，需分离对映异构体。

方法开发尝试一：

尝试正相方法

用手性色谱柱，正相系统进行尝试，

色谱柱：Daicel Chiralpak AY-H 250*4.6mm 5um，

流动相：n-Hexane:Ethanol=90:10

流速1.0mL/min

波长：220nm

结果，样品浓度10mg/mL，进样量5μL时，主峰峰高很低，且有多个峰。附图如下



分析原因：样品本身存在酮式烯醇式互变，导致多峰；正相系统背景高，而该化合物在低波段下响应较高，受到背景干扰严重。

方法开发尝试二

尝试气相手性柱去实现分离

用了仅有的两根气相手性柱，达不到完全分离。手性化合物性质接近，主要通过色谱柱来进行拆分，通过调节升温程序，也无济于事

方法开发尝试三：

尝试衍生分离

1. 寻找衍生条件。

将化合物衍生成稳定的，紫外吸收大的物质，再去实现异构分离。

醛酮类化合物易于和肼类化合物反应，设计2，4-二硝基苯肼与之反应，生成带苯环，稳定的化合物。

先通过普通反相C18色谱柱寻找衍生条件，保证衍生完全。

最终选用ACN作为稀释剂，衍生剂浓度：样品浓度=7：1，

选取超声时间20min，能保证其完全衍生。

用LCMS对最终衍生物的结构进行了确认。

用反相也确定了其最大吸收波长为356nm。

2. 尝试色谱条件

由于采用了乙腈作为稀释剂，首先尝试能耐水相的正相色谱柱来进行分离。

OJ-RH 150mm 4.6mm 5um，在甲醇-三氟乙酸水体系，乙腈-三氟乙酸水体系下，能分开，最好分离度1.2，不能完全分离。根据实验室条件，换下面色谱柱

OD-RH 250mm 4.6mm 5um，在甲醇-三氟乙酸水体系下，完全分离



至此，方法开发完成。

总结：一些性质比较活泼的化合物，走投无路之时，可以通过衍生使其成为有吸收，有保留，稳定的化合物，再去开发方法，达到实验目的。
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2021/8/1 9:32:05 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢分享！
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2021/8/4 9:25:22 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
感谢分享学习了
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Insm_e30b435
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2021/8/18 0:00:19 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请问有没有直接不衍生地试试oj这些柱子，水乙腈系统背景应该还好，可以设置200nm低波长
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小豹
Insm_2d61b688
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2021/10/18 10:01:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 Insm_e30b435(Insm_e30b4352) 发表:请问有没有直接不衍生地试试oj这些柱子，水乙腈系统背景应该还好，可以设置200nm低波长
嗯，试过的，峰很杂，烯醇式会互相转变
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zyl3367898
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2021/11/13 11:19:37 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
很好的开发思路。
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