主题:【第十四届原创】气相色谱内标法重复性不良的维修案例分析

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安平
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气相色谱内标法重复性不良的维修案例分析





概述



分析方法的灵敏度与重复性一般无关,但是按照国家药典进行内标法重复性实验时发现某些样品在某些分析条件下,分析方法的灵敏度与《药典》要求的重复性指标相关。



背景介绍



某制药企业报修,反映使用气相色谱仪按照《中国药典》附录的内标法测定某药物品种时,分析结果重复性不良,超出《中国药典》重复性允许值——2%。询问用户同时开展的其他药物品种,用户反应同样采取内标法定量的重复性结果正常。

气相色谱分析条件:

气相色谱仪:            Shimadzu GC-2010Pro AF

色谱柱:                Rtx-WAX30m*0.25mm*0.25um

柱温:                  170℃,恒温

分流比:                401

进样体积:              1ul,采用AOC-20i自动进样器

检测器:                FID280

进样口:                280



故障分析和预判



重复性不良常见的原因为进样器不良、系统(包括进样口和检测器)存在泄漏、色谱柱安装位置不良、气源状态不稳定、环境不稳定或者样品问题。

此外,既然分析重复性的结果与样品的不同有关,那么很可能与样品本身性质或者GC分析系统的特性有关。

现场检查



抵达用户现场后,检查和整理气相色谱进样口和色谱柱,排除泄漏和安装位置不良的问题。考察气源和用户实验室电气和温湿度条件,未见异常。

使用AOC-20i自动进样器连续进样六次FID的标准样品(正己烷中的十二烷和十六烷,100ppm),考察正十六烷的色谱峰面积重复性,RSD0.7%,再考察正十六烷和正十二烷的峰面积比值的重复性,RSD0.4%。此时证明系统状态良好。

然后开始进样用户的3个内标标准样品,进样之后经过用户的公式计算,测试数值的RSD大于2%

用户反映该计算公式,基于药典附录色谱法部分,内容如下:

“重复性: 用户评价色谱系统连续进样时响应值的重复性能。采用外标法时,通常取各品种项下的对照品溶液,连续进样5次,除另有规定外,其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%;采用内标法时,通常配制相当于80%100%120%的对照品溶液,加入规定量的内标溶液,配成3种不同浓度的溶液,分别至少进样2次,计算平均校正因子,其相对标准偏差应不大于2.0%

实验将用户的3个标准品数据生成标准曲线,如图1所示,发现该标准曲线存在较大的截距。《中国药典》中提到的平均校正因子,即图1种虚线的斜率。如果某物质在某方法下的标准曲线存在较大截距,那么就会发生平均校正因子数值的相对标准偏差较大。

标准曲线示意

问题解决



如果需要解决这个问题,那么就应该尽力减小系统标准曲线的截距。可以有两种方法,或者设法平移校准曲线以缩小截距,或者设法改变校准曲线的斜率。

实际试验中,修改了检测器的氢气和空气流量——对于FID检测器,不同的氢空比会对应不同的分析灵敏度,即标准曲线的斜率。氢气流量由40ml/min降低至32ml/min,空气流量降低至200ml/min。连续多次进样,数据良好。



小结





理论上检出限即标准曲线(外标标准曲线)的浓度轴截距,不同的物质在某个确定分析条件下,必然会有不同的检出限,那么必然会有强度不同的截距。尤其是某些在FID检测器上响应较低的物质。

如果不是用户对标准方法研读和理解错误的话,《中国药典》对内标法重复性评价的要求,不只是对峰面积之比重复性的要求,同时还有对工作曲线截距的要求,可能《中国药典》的内标法重复性评价方法并不完全经得起推敲。

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wazcq
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安平
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      灵敏度降低了,但是变化程度很小。

     
安平
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窃以为药典这个判定重复性的方法,存在错误。
xx_dxd_xx
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请问药典条款具体是在哪一项有这个规定?刚翻看了2020版药典的通则512,并没有内标法要80%、100%、120%三种标准品溶液的要求
xx_dxd_xx
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另外,楼主是否能提供三个标样测量结果的峰面积原始数据,以及告知具体是药典的那个项目?
我觉得这个问题有点蹊跷,似乎并没有说的那么简单,希望能进一步讨论一下
zyl3367898
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我们做环境检测时,有些标准上要求截距不大于多少。