主题:【已应助】农业部783号公告-1-2006(硝基呋喃)除油脂问题与液质肩峰求助

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做方法验证的时候操作完全按照国标《农业部783号公告-1-2006》进行实验,基质用的鱼和皮皮虾,做到后面脂肪含量会特别高,大家是怎么处理的呢?我自己采用冷冻后复温离心的方式,尽可能的避开上层的油膜进行吸取,过0.2μm尼龙66的膜,后续还是有浑浊;还是说需要配合正己烷进行处理呢?

上机的时候我多做了一管不称样,直接加标进行衍生,用这一管来做液相的优化,试了高浓度水平的,峰型是正常的,但是之后进使用样品衍生的标准点峰型特别差,呈现一个垮的状态,再重新打回不称样衍生的样品峰型也出现同样的问题,请问各位老师有什么可以指点一下吗?

仪器用的是安捷伦的1290+6460;另外,在增大电子倍增器电压以及质谱参数的优化之后,AHD的响应也不是很高,低浓度的点比较难做到,可以怎么处改善呢?
最佳答案:hujiangtao回复于2021/09/15
用乙酸乙酯反提目标物时不少杂质(如蛋白、脂肪等)进入到有机层,直接旋蒸定容后容易变浑浊。一般解决方法有两种:一是定容后置于冰箱(4℃)冷藏2小时以上,使脂肪充分析出,取出后高速冷冻离心,取上清液进行检测;二是参考《GB/T 20752-2006》标准的处理方式——加入10 mL甲醇+水混合溶液(2+1)均质,然后离心弃去上清液再过HLB小柱净化效果更好。

在pH为7-7.5的弱碱性条件下,乙酸乙酯对AOZ、AMOZ、AHD、SEM衍生产物的提取效率最高(能达到90%以上),因为弱碱环境可以抑制目标物的电离,使其绝大部分呈分子状态存在于衍生溶液中,有利于乙酸乙酯对目标物的提取或HLB固相萃取柱的吸附,从而增强富集净化的效果。但当pH值为8-10时,乙酸乙酯对AHD的萃取效率很低。


AHD和SEM的响应相对AOZ、AMOZ确实差一些,需要优化好流动相让这几种物质在色谱上尽量分离开,否则会存在互相干扰影响灵敏度

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用乙酸乙酯反提目标物时不少杂质(如蛋白、脂肪等)进入到有机层,直接旋蒸定容后容易变浑浊。一般解决方法有两种:一是定容后置于冰箱(4℃)冷藏2小时以上,使脂肪充分析出,取出后高速冷冻离心,取上清液进行检测;二是参考《GB/T 20752-2006》标准的处理方式——加入10 mL甲醇+水混合溶液(2+1)均质,然后离心弃去上清液再过HLB小柱净化效果更好。

在pH为7-7.5的弱碱性条件下,乙酸乙酯对AOZ、AMOZ、AHD、SEM衍生产物的提取效率最高(能达到90%以上),因为弱碱环境可以抑制目标物的电离,使其绝大部分呈分子状态存在于衍生溶液中,有利于乙酸乙酯对目标物的提取或HLB固相萃取柱的吸附,从而增强富集净化的效果。但当pH值为8-10时,乙酸乙酯对AHD的萃取效率很低。


AHD和SEM的响应相对AOZ、AMOZ确实差一些,需要优化好流动相让这几种物质在色谱上尽量分离开,否则会存在互相干扰影响灵敏度

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2021/9/15 12:25:29 Last edit by hujiangtao
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原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:
用乙酸乙酯反提目标物时不少杂质(如蛋白、脂肪等)进入到有机层,直接旋蒸定容后容易变浑浊。一般解决方法有两种:一是定容后置于冰箱(4℃)冷藏2小时以上,使脂肪充分析出,取出后高速冷冻离心,取上清液进行检测;二是参考《GB/T 20752-2006》标准的处理方式——加入10 mL甲醇+水混合溶液(2+1)均质,然后离心弃去上清液再过HLB小柱净化效果更好。

在pH为7-7.5的弱碱性条件下,乙酸乙酯对AOZ、AMOZ、AHD、SEM衍生产物的提取效率最高(能达到90%以上),因为弱碱环境可以抑制目标物的电离,使其绝大部分呈分子状态存在于衍生溶液中,有利于乙酸乙酯对目标物的提取或HLB固相萃取柱的吸附,从而增强富集净化的效果。但当pH值为8-10时,乙酸乙酯对AHD的萃取效率很低。


AHD和SEM的响应相对AOZ、AMOZ确实差一些,需要优化好流动相让这几种物质在色谱上尽量分离开,否则会存在互相干扰影响灵敏度

老师您好,流动相用的是 2mM的乙酸铵水和甲醇,复溶液是5+95的甲醇-水,梯度方面初始流动相是80的水相,梯度是把水相从80降到10都试过,就是有一个问题比较困惑,我先打的高浓度的水衍生标液,峰型是很正常的;但是打用鱼基质衍生的标准点就出现了肩峰的问题,之后我再换回来打水标液,也会同样的肩峰,请问这种现象有什么问题存在的可能性呢?
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原文由 Insm_06596012(Insm_06596012) 发表:
老师您好,流动相用的是 2mM的乙酸铵水和甲醇,复溶液是5+95的甲醇-水,梯度方面初始流动相是80的水相,梯度是把水相从80降到10都试过,就是有一个问题比较困惑,我先打的高浓度的水衍生标液,峰型是很正常的;但是打用鱼基质衍生的标准点就出现了肩峰的问题,之后我再换回来打水标液,也会同样的肩峰,请问这种现象有什么问题存在的可能性呢?
应该是鱼基质的影响,可能有残留在色谱柱上的杂质影响目标物,设置梯度程序时高比例有机相多冲一会儿。我们一般衍生时二硝基苯甲醛加入量是标准的2倍,加少了可能受基质影响导致衍生不完全。
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原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:
应该是鱼基质的影响,可能有残留在色谱柱上的杂质影响目标物,设置梯度程序时高比例有机相多冲一会儿。我们一般衍生时二硝基苯甲醛加入量是标准的2倍,加少了可能受基质影响导致衍生不完全。


重复打了几针都有这样的问题,后续改用横流(80有机、70有机、60有机、50有机都试过了)冲,峰型都是塌的,这种情况是不是我们的前处理大概率残留了物质在色谱柱上带来了影响呢?并且是很难除去的影响?

(非常感谢老师的耐心回答)
唔话俾你知
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衍生试剂配制的浓度可以配高一点,最后定容混浊,加正己烷高速冷冻离心,过滤膜,仍然难过滤膜/混浊,可以再接多几个滤膜,AHD和SEM是比AMOZ和AOZ响应低好多
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2021/9/16 0:23:23 Last edit by v2833101
wsz29
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是不是共流出的基质影响,可以试试让出峰时间往后推迟一下。
chenxyz22
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AHD和SEM的响应确实是低一些,特别是AHD。6460在仪器正常的情况下,检测是没问题的,效果不好的情况基本归结于前处理和色谱条件。建议尝试优化色谱条件:不同色谱柱、调整流动相(比如水相换成0.2%乙酸)、调整梯度洗脱程序(增加目标峰之间的分离度,分析时间延长也可以试试,先解决主要问题)。