主题:【分享】反向色谱中使用碱性缓冲盐

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最近几年,在碱性pH条件下使用反向色谱变得越来越普遍,我想要开发一些新的功能在碱性pH条件下使用反向色谱有哪些缓冲盐可以推荐的?

确实,对于更宽范围pH的探索打开了一个新世界的大门,这在过去难以想象,一些新的填料可以达到pH 10,有的甚至可以达到pH 12,如果缺乏适宜的缓冲盐,传统的填料甚至可以在碱性条件下使用。


应该避免的更激进的缓冲区是什么?


显而易见,磷酸盐比其他的缓冲盐在碱性pH范围内作用更强,因此我不推荐在硅胶填料或者无机-有机杂化的填料下使用碱性的磷酸缓冲盐,磷酸盐的pH值是有限的,氨也很有腐蚀性,但它可以很容易地被有机胺取代,此外,有机胺可以覆盖从pKa 9-11.5更宽的pH范围。


Q.:OK,then which buffers are recommended?


好的,有哪些推荐的缓冲盐呢?


我们汇总了三张关于在碱性pH适宜的缓冲盐的表,第一个是无机,第二个是有机的,第三个是两性离子的,他们在生物化学上广泛运用,一些缓冲液也可作为流动相添加剂,如甲酸和乙酸在酸性pH范围内使用,然而,流动相添加剂对于控制分析物pKa周围+/- 2pH单位外的电离是有用的,,然而如果分析物的pKa和流动相添加剂的pKa是在相同的pH范围,那么它对于保留或者峰型改变的作用还不如真正的缓冲盐


在无机缓冲盐中,由于多种原因,碳酸氢铵是一个非常好的选择,第一点,归功于碳酸离子和铵离子相结合的缓冲能力,它可以覆盖一个很宽的pH范围,


第二点,它因为是易挥发的成分,所以它可以用在MS检测器上面,然而它在低紫外范围内有小的背景吸收,这个和在酸性范围内的甲酸或者换甲酸或者三氟乙酸类似,瑕不掩瑜,它可以使用在流动相中有低紫外吸收的梯度洗脱中。


在有机缓冲盐中(表2),有几个可以在比较宽的pKa值范围内使用,如三甲胺的可以到9.7,吡咯烷可以到11.3,三甲胺拥有极低的沸点,可以用在MS检测器上面,当然,你需要用一个在MS上面使用的补偿离子如甲酸盐或者你可以在一个酸性pH范围使用想要使用甲酸或者乙酸的情况下只把三甲胺作为一个流动相添加剂,我们曾经在XTerra®反向色谱柱上面使用吡咯烷缓冲盐在pH 11.5的条件下成功运行可一段时间,三乙胺是传统的添加到反向缓冲盐中以此来改善峰拖尾,人们因为他刺鼻的气味而避免使用它。


气味一般是碱的缺点,然而,如表3所列的,两性离子缓冲盐在这一方面好很多,他们不易挥发的,因此他们没有气味,另一方面,这个也使得他们不能在MS检测器上面使用,然而,如果你的方法永远不会在MS检测器上使用,那俩性离子的缓冲盐也许是一个非常好的选择,他们在生物化学上面应用特别广泛,而且纯度很高,在表3里面他的pKa的范围从 6到10.5。这个是对于本文讨论的所有pH值范围都有合适的缓冲液



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dahua1981
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