主题:【分享】对于LC/MS使用的缓冲盐

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什么类型的流动相添加剂可以用在反向色谱柱和LC/MS检测器?

随着LC/MS的使用越来越广,原来使用频率特别多的缓冲盐如磷酸盐逐渐不再使用,一个原因是上述的仪器需要使用易挥发的流动相添加剂,并且由于磷酸盐不是易挥发的,所以随着使用时间加长,有可能阻塞LC/MS,如果因为这个停工检修有点得不偿失,需要消耗大量的人力物力和时间,一些新的仪器可以容纳高达10mM的磷酸盐并且延长一段时间,但也许要每隔一段时间检测


因此使用MS检测器的标准液相法法使用的流动相添加物都是易挥发的,最简单的添加物如简单的酸,如甲酸或者乙酸,他们常用的浓度在0.1%~1%之间,这个提供了一个酸性环境,足以应对完全的质子化分析,这足以很好的控制酸和碱分析物的保留


然而,凡事都有例外,一些方法有其自己的限制,强酸流动相环境的一个不足就是他对酸性分析物的离子化的抑制,因此,对于MS检测器一个更好的模式是用稍微高的pH来使得MS检测器在一个阴离子环境,在这样的一个例子里,用甲酸胺与乙酸铵来调节pH,对于控制保留因子非常重要,甲酸的pKa是3.7,乙酸的pKa是4.75,因此这些缓冲盐的pH值需要我们关注,他们的一般浓度是20mM,有时候甚至低于5mM,在如此低的缓冲盐浓度里,使用缓冲盐最适宜的环境是缓冲液的pKa非常接近pH,实验小知识:在如此低的缓冲盐浓度的体系里面,使用缓冲盐的pKa在+/-1pH范围内。


正确选择pH值可以避免的另一个困难是由于基质干扰而抑制被分析物的电离离子,这个是用LC/MS分析血浆样品的通病,然而,大部分的基质干扰本质是离子或者离子化,而感兴趣的解析液通常也是离子的,因此,共同洗脱模式可以通过改变流动相的pH来改变,共同洗脱模式的分析通过一个适当的改变可以避免相互干扰和离子的抑制。


有时候我们在碱性条件下运行液相也是可行的,其原因可能是避免了离子抑制。或希望通过改进所关注的分析物的电离作用来提高灵敏度,酸性化合物可以在碱性pH范围内取得最好的MS反应,另一方面,我们也发现碱性化合物在在碱性条件依然有惊人的反应,我们在弱碱的流动相里面使用的添加剂是碳酸氢铵,它的pKa是9.2和10.2,因此,碳酸氢铵可以用在较宽的碱性环境,最合适的是在pH=10条件下,这个在缓冲区MS上面完全兼容,碳酸氢铵是仅有的易挥发的缓冲盐,加热可以分解成二氧化碳,水,胺


总结,在MS上面使用的缓冲盐最好酸性pH范围从pH 3到pH 5.5,碱性pH范围从pH 8.5到pH10。



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