主题:【第十四届原创】液相二极管阵列检测器定性研究实战运用

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(1) 背景

用AgilentII检测某项目中控时发现原料裂峰,降低进样量后仍然裂峰,排除溶剂效应。后怀疑是色谱柱柱效不好,通过更换色谱柱后,裂峰情况依然存在。



(2) 问题排查与解决

更换Agilent1260仪器后发现不裂峰,怀疑可能是一代和二代仪器型号差别引起的分离度差异问题。



(3) 深入调查

针对此情况,怀疑是仪器问题,调查Agilent1260II裂峰的原因。其他项目在Agilent1260II上并未出现此类情况。故重新将裂峰的样品进样,发现仍旧裂峰。

查看裂峰的紫外吸收波长,发现有两个吸收波长,一个是原料的吸收波长,另一个可能是杂质的吸收波长。两者的紫外吸收图不一致,最大吸收波长有区别的。所以这两个可能是不同的物质。





后重新查看Agilent1260II上正常峰的吸收波长,发现该峰的紫外吸收波长和Agilent1260上原料的吸收波长并不重叠,再次说明该峰里面包含杂质,未分开。



(4) 结论与总结

最后说明是有杂质未分开,与色谱柱和仪器无关。和技术员沟通了解到是合成人员在更改工艺,最终并不会采用这种工艺,所以并未优化该分析方法。

这个杂质异常分析过程提示我们要学会合理利用紫外吸收原理:对于同一物质,不论浓度大小如何,最大吸收峰所对应的波长(最大吸收波长 λmax) 相同,并且曲线的形状也完全相同。这样可以帮助我们快速的判断异常峰的情况。

(5) 功能拓展-利用DAD峰纯度功能也可以确认是某峰是否包杂质

在DAD检测器上,检查某一色谱峰(A)的峰纯度,首先要对A进行恰当的积分,然后选择合适的参比(分自动和手动,一般选自动,特殊情况下选手动),再选择波长范围(210nm-400nm较合适吧,再低会有基质的末端吸收干扰,会影响峰纯度检查的可信度,当然这要看具体的流动相及等梯度情况啦),之后选择固定阈值(国家局要求在990及以上),最后点一下要测的主峰就可以了。我简单的说一下峰纯度检查的原理吧,是这样的,当要检查某一色谱峰的峰纯度(A)时,软件会在A的起始点、前半中点、顶点、后半中点和结束点(共5点)分别取紫外全扫描图来进行拟合度检查,当拟合度大于阈值(即上述的990)时,软件默认为A的五个点都是一种物质,即A是一种物质的紫外吸收峰,纯的,相反,当拟合度低于阈值时,软件默认A的五个点不是一种物质,即A是两种或两种以上的物质的紫外吸收峰,不纯,就要再进行条件的优化分开它们了。所以峰纯度检查是选择有关物质检查色谱条件的重要环节之一,也就是方法的专属性啦。安捷伦一般是选择光谱归一化法计算峰纯度,简单的说就是从色谱峰上选择5个点(峰起始点、峰上升一半处的点,峰顶点、峰下降一半处的点及峰的结束点,

当然作为DAD也可以选择更多,提取这5个点的光谱图进行叠放,看其重合程度来判断色谱峰纯度。取这5个点的纯度因子平均值和阈值比较(一般采用固定阈值990即可),大于990即为纯峰,反之则为不纯。

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