主题:【已应助】求教一些紫外分光光度法的一些小问题!

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pengf_huo灬
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求教一些紫外分光光度法的一些小问题:

1. 标准曲线绘制时,假设标准要求的是6个浓度点,我能否再额外增加一两个高浓度点,来扩大该曲线的可检测范围?

2. 紫外分光光度计在使用时,如果我测完一个样后,是否要合盖呢?然后测下一个样的时候再打开盖把比色皿放进去?

还是说在测样过程中,除读数外,盖子都可保持打开?这样对仪器寿命或者精准度是否有影响呢?

3. 比色皿内的溶液一般建议是2/3(或者是2/3-3/4 ...)的高度,如果我不小心倒多(如4/5)或者倒少了溶液(如1/2),对读数是否有影响呢?

4. 在测样时,比色皿一般怎么润洗呢?

①一种说法是低浓度到高浓度检测时,不需要润洗,可直接测样

②一种说法是在检测时,需要用待测溶液润洗两遍以上

③一种说法是在检测时,需要先用纯水润洗,再用待测溶液润洗两遍以上。

小问题有点多,希望各位大佬指教!回答哪一个问题都可!感谢!!!
推荐答案:hhciq回复于2021/11/30
经验,供参考

1、可以。一般标准给出的是最佳的,但不代表不可以;
2、建议盖上。因为光电管避免强光可以增加寿命、减少平衡时间;
3、不影响。小心别潵出。透光的光束是很小的一个点,用纸片档一下可以看到;
4、针对不同样品,有不同的清洗要求。
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哈希
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hhciq
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经验,供参考

1、可以。一般标准给出的是最佳的,但不代表不可以;
2、建议盖上。因为光电管避免强光可以增加寿命、减少平衡时间;
3、不影响。小心别潵出。透光的光束是很小的一个点,用纸片档一下可以看到;
4、针对不同样品,有不同的清洗要求。
Nerif
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1,如果是浓度1-6,你增加4.5和5.5是可以的,如果是增加7和8,要考虑分光光度计的量程,我举个例子,我们实验室的冷原子荧光最大吸光度是2.000,可是这台仪器设计理念上最大的吸光度0.140,超过0.140太多的数据就会失去线性。
2,短时间可以不关,没啥影响。长时间怕灰尘或者药品污染。
3,多了没影响,就是容易洒出来污染腐蚀样品池。少了不行
4,标准溶液从低到高测定,用第二种润洗,测实际样品,需要测完前一个样品,用参比液清洗,然后用待测样品润洗
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2021/11/30 8:35:00 Last edit by Ins_6d6d3274
七世念残
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个人观点,仅供参考
1.分情况而定;强制性标准且并未描述为“参考浓度”的不可以,因为改变了线性范围,可能导致线性发生变化,有评审老师会认为是方法偏离。其他情况可在方法验证中体现,一般不会出问题。建议老师在使用方法时,最好涵盖标准曲线的最大点和最小点。
2.建议盖上。毕竟还是有光电管在仪器里,多少能提高仪器寿命。
3.可能有影响。多了容易使溶液洒出,或者流到外壁上;少了容易低于光束点,同时容易挂液
4.依据各个方法,不一而论。
mingxiaoyan
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1.标准曲线需要几个数据点,是由所检测组分的浓度范围、分析仪响应特性、干扰因素、浓度与检测信号响应类型有关的。
3个点:对于一些低浓度,特别是微量分析,并且浓度范围不是很大的,检测器响应可靠,背景干扰非常小的,则可以选用较少的工作点就行,一般有3个浓度点就足够了,有些甚至可以只用一个浓度点就行,另一个点直接用坐标原点。
4~6个点:对于平时测量的样品浓度范围较宽,并且检测器响应不完全是一次曲线(直线)的,可以采用二次曲线或分段校正方式,以减少数据偏差,这种情况就需要多用几个数据点,如果不分段,数据点有4~6个就够用。
至少两个点:但如果是分段校正,则每段需要至少两个数据点。而对于一些样品无浓度范围规律的,特别是一些检测机构,如果分析仪的检测响应可靠,环境因素影响少的,可以做校正曲线。若是环境因素影响大的,则不必做校正曲线,而采用标准加入法或标准加入-一次稀释法反而简便一些。
实际上,我们一般是做五个点(不包括零浓度);一般以检出限的5~10倍为第一个点,以后根据1倍递增,最高浓度是最低浓度的10~20倍为宜(理化分析实验为例)。当然,要根据仪器的灵敏度来调整。
2. 理论上来说,如果开口容易造成腐蚀或污染,比较实验室环境不会那么洁净,一般仪器不用的时候也是要求用专门的仪器布苫盖的。
3.一般比色计的光源是打在比色皿的对角中心点位置,也就是比色皿一半的高度。为了保证样品溶液能被比色计光源穿透而测得吸光度,所以比色皿中的溶液要占比色皿2/3高度,因为探头射出的射线光有一定高度,太低的话就不是溶液的吸光值了。
4.楼主说的这几种情况是针对不同情况下的处理方式
ztyzb
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楼主既然问的是紫外分光,个人从经验上给出建议,仅针对紫外的标曲绘制,大型设备不受影响。

1、上图是HJ 168-2020中生态环境标准制定时的要求,一般标准里如果给出了标准曲线浓度最高点基本上是不稀释能呈线性的最高点,也是不稀释样品测得的最大浓度,所以不建议修改;

2、仪器寿命或者准确度和光源有关,一般如无大问题光源寿命只和时间有关;建议使用时合盖,不然容易出现零点吸光值漂移;

3、能保证光路全透过溶液即可,像HJ 503-2009挥发酚的时候为了测定吸光值会在比色池内垫东西把比色皿抬高;

4、最正规的操作是每测一个点调零一次设备,但低浓度到高浓度影响较小为了节约时间直接润洗即可。即便如此,长时间使用光度计时需要定期调零。
未来工程师
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参加比赛吗? 平时这种无关结果的不用在意,比赛讷怎么干净怎么来即可,没有标准的,永远有人更进一步