主题：【已应助】甲醇乙腈做流动相的区别

在一般的色谱分析中基本没啥大的区别，都是常用的有机相，乙腈用的可能话比较还多一点；但是甲醇、乙腈官能团不一样，不同化合物在甲醇和乙腈中的分配系数不一样，对于某些化合物分配系数差异大的，色谱行为就区别比较大了。

①吸光度:乙腈在紫外短波长上(200nm 以下)HPLC级吸收小。所谓 HPLC 级是除去具有吸收UV的杂质，在规定的波长上吸光度限制在规格值以内。在UV 检测时，产生的噪声小，因此在进行UV短波长上的高灵敏度分析时乙腈HPLC级最适宜。另外，在UV检测中的梯度基线上也是乙腈HPLC级产生鬼峰少;
②压力:乙腈低。从表可知，乙腈粘度系数比甲醇小，因此在相同流速和有机相比例条件下，用乙腈流动相系统压力要比甲醇小，同条件下可得到更高的理论塔板值，延长色谱柱的使用寿命;③洗脱能力:乙腈较强。反相色谱中，如果要在相同的时间内分离同一组样品，100%甲醇的冲洗强度相当于89%的乙腈/水或66%的四氢呋喃/水的冲洗强度;
④分离(洗脱)的选择性。由于有机溶剂分子的化学性质(甲醇-质子给体、乙腈-质子受体)
不同导致乙腈和甲醇在分离的选择性上不同。因此，在用乙腈类不能获得很好的分离，可以考虑用甲醇试试;

⑤峰形:对于某些物质两者峰型差别较大。如水杨酸类化合物用乙腈时拖尾大，用甲醇可抑制;而聚合物类填料与硅胶填料的反相柱相比，更有峰形变宽的倾向(如用聚苯乙烯柱分析芳香族化合物)，这在流动相用甲醇时非常显著，而用乙腈则不明显，所以用聚合
物类反相用柱时建议采用乙腈。

楼主，甲醇乙睛作为流动相的差异还是有的，论坛内也有相关老师讨论转载资料，差异性表现在以下方面：
1.吸光度

对于HPLC级溶剂(我们在HPLC分析中应始终使用HPLC级溶液)，乙腈的吸光度在这两种溶剂中最低，非常适合低紫外光分析。甲醇在205-210nm左右有较高的紫外光吸收值，在非常低的紫外光范围内略有限制。

　2.溶剂溶解性

乙腈和甲醇在溶解多种缓冲盐和样品的能力上存在显著差异。这些差异在方法开发中至关重要。

1.流动相溶解度

梯度运行显示低重现性或失败的一个常见原因可能与运行高浓度缓冲液和高浓度有机溶液有关。而含有浓度小于10mM盐溶液的水溶液/有机溶液在大多数梯度条件下不太可能沉淀(最多98%是有机溶剂，而不是100%)，大多数与高效液相色谱应用一起使用的缓冲溶液会有更高的盐浓度，当分析条件中有机溶剂含量较高时可能会从溶液中析出(导致堵塞，泄漏，插头和不准确的结果)。在反向色谱法中选择有机组成时要谨慎。确保使用的溶液在所有浓度下都是稳定的。还要验证缓冲能力是否仍然存在，当使用高有机浓度时(当缓冲液被稀释时)。

不确定盐是否会溶解?只要把同样浓度的溶剂混合起来做测试就行了。观察它，有任何浑浊或可见颗粒吗?你就可以得到你需要的答案。

甲醇总体上具有更好的溶解度特性(优于乙腈)，这意味着它在较高浓度下能更好地溶解大多数盐，从而获得更好的性能和更少的沉淀。

2.样品的溶解度(对峰形和保留的影响)

液相色谱的一个基本要求是样品完全溶解在流动相(初始流动相)中。在分析前，将样品溶解在流动相或强度稍弱的溶液(不是更强的溶液)。这确保它将作为一个集中的段塞加载到柱的顶部，以改善峰形和RSD。如果样品没有完全溶解在流动相，那么你实际上并没有分析整个样品。甲醇优于乙腈的另一个方面是它能完全溶解更多类型的样品。这一改进的溶解度可能导致更好的整体峰形。甲醇的选择性也不同于乙腈(不仅仅是洗脱强度)，这可能导致峰洗脱时间与预期的保留时间不同。这也是为什么在开发反向方法时，我们总是尝试使用含有乙腈或甲醇的不同流动相混合物的另一个原因。

永远不要假设一种溶剂会比另一种溶剂更好。太多的色谱新手只使用乙腈作为他们方法开发的主要有机溶剂。请不要犯他们的错误，这样的策略表明缺乏实践经验和知识。您必须首先分别尝试它们(乙腈&甲醇)用你的样品来评估结果(在适用的情况下最好从不同pH值的全面梯度开始)。如果您在最初的时间内测试了这两种类型的溶剂，那么将获得回报，因为还没有开发出能够使用您自己的样品来预测真正准确的结果的模拟器。可能会惊讶地发现，有多少样品使用甲醇溶液显示出更好的峰形和性能。如果没有看到任何改善，至少你现在知道了，因为你已经尝试过了，并且可以满怀信心地前进。

3！背压

乙腈的粘性比甲醇小，因此通常会导致整体柱压和系统背压降低。乙腈和水的混合物也会发生吸热反应(冷却溶液)，从而在溶液中捕获气体。如果你预先混合你的流动相，让它静置几分钟后在制备。

甲醇比乙腈更粘稠。它还有一个不寻常的特性，就是甲醇和水的50/50混合物会产生一个比甲醇或水更高的系统和柱背压。它的峰值压力是由50/50的混合物所观察到的。两种溶液在开始混合释放出一些气体也会产生放热反应。在制备溶液时，最好是让溶液静置几分钟，然后在高压液相色谱系统中使用。

一、在紫外吸收方面
    对于HPLC级溶剂乙腈的吸光度在两种溶剂中都是低的非常适合于低紫外分析甲醇在205-210nm范围内具有较高的紫外截止值而在极低的紫外范围内则略有限制。
    二、在溶剂溶解性方面
    乙腈和甲醇在溶解多种缓冲盐和样品的能力方面存在显著差异这些差异在方法开发中至关重要。
    三、在流动相溶解度方面
    大多数与高效液相色谱(HPLC)联用的缓冲液在分析条件下有机溶剂含量高时会从溶液中沉淀，造成堵塞、渗漏、堵塞和不准确的结果。在选择反相色谱中的有机成分时，我们应该小心确保所使用的溶液在所有浓度下都是稳定的甲醇通常比乙腈具有更好的溶解性，这意味着它可以更好地溶解大部分盐，在较高的浓度，从而获得更好的性能和较少的沉淀。
    四、在对峰形和保留的影响方面
    高效液相色谱(HPLC)的基本要求之一是样品在流动相中完全溶解。分析前，样品溶解在流动相或稍弱的溶液中这将确保它将作为集中段塞加载到柱顶，以改善峰值形状和相对标准偏差如果样品在流动相中没有完全溶解，那么你实际上并没有分析整个样品。甲醇优于乙腈的另一个方面是它能完全溶解更多的样品这种改善的溶解度可能导致更好的整体峰形状甲醇的选择性也不同于乙腈的选择性，这可能导致峰洗脱时间和预期保留时间之间的差异。
    五、在系统背压方面
    乙腈的粘度小于甲醇的粘度，因此通常降低总塔压和系统背压乙腈和水的混合物也吸收热量以捕获溶液中的气体如果你预先混合你的流动相，让它站立几分钟前准备甲醇比乙腈厚另一种不寻常的特征是甲醇和水的50/50混合物产生比甲醇或水更高的系统和柱背压。

各位老师讲得很好，稍稍补充一下。甲醇作流动相时，对于一些带比例阀的仪器，系统平衡的时间要相对长些，因为甲醇与水要放热，产生小气泡。这时选择乙腈会好些，但使用乙腈要注意勤换，不建议补加，因为每次储液瓶留那点乙腈时间长了会聚合，影响分析，特别是使用质谱时，此外用apci源建议使用甲醇而不是乙腈。

相同比例洗涤能力明显不同

成本方面，甲醇低于乙腈。