主题：【已应助】保健食品乳杆菌检测

不会出现负数的，因为乳酸菌总数是乳杆菌、双歧杆菌和嗜热链球菌的总和。

不会出现负数，详细可以参考标准解读http://www.hopebiol.com/asphtml/refere10580.htm

1、单一菌种的情况

  （1）只有双歧杆菌时，使用MRS培养基或者双歧杆菌琼脂倾注、培养、计数；

  （2）只有乳杆菌时，使用MRS培养基进行培养计数；

  （3）只有嗜热链球菌时，使用MC培养基进行培养计数。此处需要说明一下，嗜热链球菌在MRS上也能生长良好（如图1），所以当只有这种单一菌种存在时，日常工作中，如果不需要完全按照国标要求，是否可以使用MRS培养基进行培养计数。

综合比较，当只有单一菌种存在的情况下，如果不需要严格按照国标要求来操作，只需要将样品稀释后，取合适浓度用MRS培养基进行倾注计数即可。MRS可以作为通用培养基使用。

2、两种菌的情况

  如果样品中有两种菌存在，除了要检验出乳酸菌的总数外，有时还需要对其中各个菌种的数目进行统计。

  （1）含有双歧杆菌和乳杆菌时，使用MRS培养基对样品进行倾注后厌氧培养，即可得出两种乳酸菌的总数；而如果还想知道里面所含双歧杆菌的数目，则需要同时用改良MRS进行倾注计数，改良MRS上长出的菌落数，即为双歧杆菌的数目。

  （2）含有双歧杆菌和嗜热链球菌时，标准中使用改良MRS和MC进行倾注计数，分别得出双歧杆菌和嗜热链球菌的数目，两者加在一起即为菌落总数。采用改良MRS对双歧杆菌进行计数，这个没有争议，因为在改良MRS琼脂中，只有双歧杆菌能生长，嗜热链球菌不能生长。

  在MC琼脂上，虽然在厌氧条件下，嗜热链球菌和双歧杆菌都能生长（如图2），但本标准中要求需氧培养，所以此时MC琼脂上长出的就只有嗜热链球菌了。这个方法是可以达到计数嗜热链球菌的目的的。

所以，要想从同一种培养基上，明显地区分出两种菌来，分别计数，确实也不容易。

  问题的关键在于，标准中明确规定，将两种培养基上培养出的菌数，进行相加，即得乳酸菌总数。通过上面的分析，我们不难得出，这样处理，得出的结果实际上是把乳酸菌总数翻倍了，即乳杆菌和嗜热链球菌的数目分别重复了两遍，并且也不能明确得出每种乳酸菌的具体数目。

  综合以上三种情况，我们可以总结为，在不需要严格按照标准操作的前提下，如果已知样品中有两种乳酸菌，要检验样品中的乳酸菌总数，只要用MRS进行倾注就可以了，平板上长出的菌数即为乳酸菌总数；而要确切地知道其中某一种菌的数目，则要根据情况进行培养基的选择：使用改良MRS可以很容易得出双歧杆菌的数目，使用MC可以勉强计出嗜热链球菌的数目，但要注意避免其他菌种的干扰；对于乳杆菌的数目，只要用菌落总数减去已经计出的另一种菌的数目即可。

3、三种菌的情况

  标准中规定，用MC需氧培养，得出嗜热链球菌的数目；MRS厌氧培养，得出乳酸菌和双歧杆菌的总数，最后将两者加和，即为乳酸菌总数；如果要单独检验双歧杆菌的数目，则采用改良MRS琼脂进行厌氧培养后计数可得。

  这里同样存在上面所述的问题。

  对于标准中为什么这么写，我们可以理解成，它默认了在MRS琼脂上嗜热链球菌不会生长，而在MC琼脂上乳杆菌不会生长？但这明显是与我们实际操作情况不相符的。

  如果按照这种要求进行计数，最终所得的数目，将会把乳杆菌和嗜热链球菌重复计数。

  在日常工作中，如果不需要严格按照国标操作，要解决这一问题，我们还是借助这两种培养基，只要将MRS上长出的所有菌落数出来，即为样品中的菌落总数。而如果非要追究里面所含嗜热链球菌的数目，只能借助MC琼脂，计数时要仔细甄别，不要误将乳杆菌计成了嗜热链球菌，从而导致结果误差；最后用菌落总数减去嗜热链球菌的数目，即为乳杆菌的数目。

不会出现，含有双歧杆菌和乳杆菌时，使用MRS培养基对样品进行倾注后厌氧培养，即可得出两种乳酸菌的总数；而如果还想知道里面所含双歧杆菌的数目，则需要同时用改良MRS进行倾注计数，改良MRS上长出的菌落数，即为双歧杆菌的数目。