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主题：【第十七届原创】植物性样品全氮的检测

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城北小飞虎

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加班小队发表于：2024/09/03 09:46:43 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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植物性样品全氮的检测

1、样品制备

1、将待测样品置于托盘中放入烘箱105℃烘2个小时，样品烘干后冷却至室温，用图中破壁机进行粉碎处理后过40目筛子后装入样品袋待检测。

2、粉碎机的清理，在进行下一个样品粉碎前要将破壁机彻底清理干净，以避免交叉污染引起定量结果不准确，在清理死角时可用洗耳球进行吹扫，将死角彻底清理干净。

2、药品的准备

1、催化剂硫酸铜、硫酸钾的配置

按照硫酸钾5g，硫酸铜0.4g的比例进行配置。一般比如称50g硫酸钾到研钵中，再加4g硫酸铜，在研钵中碾碎混匀装瓶待用。

2、400g/L氢氧化钠，20g/L硼酸配置。

2.1氢氧化钠配置用两个500ml烧杯，一个烧杯称量200g加水溶解，用玻璃棒搅拌，注意每个烧杯加水量不要超过400ml，在加水溶解的过程中会释放大量的热，小心烫伤。这时溶液会呈现浑浊状态，待两个烧杯冷却后，转移到1000ml容量瓶中，用蒸馏水冲洗烧杯定容到刻度。这时候溶液就会变得澄清透明。定容好后转移到定氮仪的碱液桶中。氢氧化钠溶液不能长期在玻璃容器中存放。

2.2硼酸配置用500ml烧杯称取20g用蒸馏水溶解后定容到1000ml容量瓶，转移到定氮仪中的酸液桶中，用黑塑料袋包着的那个桶。

3、甲基红、溴甲酚绿指示剂的配置

3.1甲基红称取0.1g到小烧杯中，加适量95%乙醇溶解，后定容到100ml容量瓶中。甲基红不大好溶解，可以多次少量加95乙醇用玻璃棒不断搅拌，转移到100ml容量瓶中。

3.2溴甲酚绿称取0.1g到小烧杯中，加适量95%乙醇溶解，后定容到100ml容量瓶中。溴甲酚绿比较好溶解，溶解后颜色为黄红色，不是绿色。

3.3混合指示剂。按照一份甲基红，五份溴甲酚绿的比例配置。吸取10ml甲基红，加50ml溴甲酚绿混合摇匀。混合指示剂加到20g/L硼酸里面是显红色的。

4、0.1mol/L盐酸溶液

用来滴定的盐酸标准溶液，买的带有证书的0.1001mol/L成品。

3、凯氏定氮仪的校正

凯氏定氮仪的校正主要为了检测仪器的整个状态是否运行正常，是否存在蒸馏漏液等状态造成的结果不准。此步骤在做样品之前先进行。取硫酸铵试剂置于烘箱中105℃烘3-4个小时，放于干燥器中冷却至室温。化验室有分析纯，纯度99%。称取0.1g左右于定氮管中，加30ml水，混匀溶解，加50ml 400g/L氢氧化钠，接收瓶加25ml 20g/L 硼酸溶液，加500ul混合指示剂，开始蒸馏5min，用盐酸溶液滴定有蓝绿色变成灰红色，记录滴定体积。根据公式（V1-V0）XCX0.014计算氮含量。其中V0空白等于0.05ml，C=0.1001mol/L。举例，比如称取0.1046g硫酸铵，(NH?)?SO?其中理论氮含量等于0.1046X0.99（分析纯硫酸铵含量）X14.0037X2（硫酸铵分子量中氮的占比）/132.14(硫酸铵分子量)=0.02195g（0.1046g硫酸铵中氮含量）。实际测定值盐酸滴定体积V1=15.60ml根据公式计算氮含量（15.60-0.05）X0.1001X0.014=0.02179g。回收率=0.02179/0.02195X100=99.27%回收率在99%以上，证明此台仪器整个蒸馏运行状态符合要求。要是回收率低于95%以下，证明此台仪器存在问题，对结果影响较大。

4、样品的消解

开始定氮管中加入5.4g硫酸钾硫酸铜混合催化剂，称取0.5g左右样品加入到定氮管中，注意加入的时候不要让样品沾到管壁上，以防消解不到影响结果。然后用10ml移液管加入10ml硫酸，沿管壁缓缓流入管中。注意硫酸有很强的腐蚀性，操作过程中一定戴好手套，在吸取的过程中一定注意安全，以防意外。下面附图硫酸的MSDS，使用硫酸前仔细阅读。

加入硫酸后可以先设置200度左右消解半个小时，然后温度加到420度消解1个小时直至管内颜色变为澄清透明亮绿色为止，即可取出冷却至室温，待蒸馏测定。

5、样品的蒸馏

1、仪器开机。在仪器的后面有个开关，向上一推，再按侧面的按钮开关，进行开机。由于该定氮仪自动蒸馏模式，自动加碱液存在加液不准不稳定，所以采取手动蒸馏模式。

开机后按照屏幕的提示，进行功能选择，如图屏幕显示按向下键，则按面板上的向下键进行选择。

在弹出的屏幕画面根据提示按向上键选择手动蒸馏模式，进入手动蒸馏界面，打开冷凝水，接好接收瓶，定氮管中加入30ml蒸馏水，50ml氢氧化钠后，卡到蒸馏位，稍微旋转一下使其卡紧，按向左键开始蒸馏，计时5min。这里需要注意的是，打开蒸馏水后按蒸馏开始，冷凝水才开始流淌，蒸馏不开始不会流淌。安全门也要关闭，才能开始蒸馏。

图中的大桶是盛放蒸馏水的，仪器通过吸取蒸馏水到内被蒸锅内将水加热产生水蒸气来进行加热蒸馏，所以要保持桶内蒸馏水至少在一半以上。

消解完的定氮管冷却后颜色会有亮绿色变为浅蓝色，手动用图中离心管加入30ml水，50ml 400g/L氢氧化钠，沿管壁缓缓加入，立马蒸馏。往250ml锥形瓶中加入25ml 40g/L硼酸，加入500ul混合指示剂，加入指示剂后颜色应为红色，随着蒸馏变为蓝色。这里需要注意的是氢氧化钠溶液只有在立马蒸馏的时候才能加，不能加好后等待蒸馏。

加入的氢氧化钠溶液要过量，使定氮管中液体呈碱性才能将氨蒸馏出来。一般为加酸体积的4倍，比如加入硫酸10ml，我们至少加入40ml以上的氢氧化钠溶液，这里50ml是合适的，加入后整个溶液显示棕黑色说明加碱过量。如果加完碱后颜色还是蓝色说明加碱不够。当然有一种情况，就是长时间等待定氮管内出现结晶沉淀，在加入氢氧化钠的后可能不会变黑色，但是一蒸馏的时候结晶消失立马出现黑色。

加碱后定氮管立马放入蒸馏位稍微旋紧，冷凝管插入硼酸接收瓶液面以下。

点蒸馏开始蒸馏，蒸馏圆圈图标会由空心变成实心。定氮管沸腾后开始计时5min。

6、样品的滴定

蒸馏完后硼酸接收瓶变为亮蓝色

用标准盐酸溶液滴定至由亮蓝色变为浅灰红色为终点，记录滴定体积。

7、计算

根据公式计算结果，一般一个样品做两个平行，计算平均值。

氮含量（%）=

V1：样品滴定是消耗标准盐酸的体积数（ml）

V0：空白滴定时消耗标准盐酸的体积数（ml）一般很小（0.08ml）

C：盐酸标准溶液的浓度（mol/L）

m：样品质量（g）

0.014：每ml 1mol/L盐酸标准溶液相当于氮的克数。

若要计算粗蛋白的含量则由氮含量结果乘以6.25

8、清洗定氮仪

每次做完一批样品后，取一根定氮管加入30ml蒸馏水，接收端接入一个空的锥形瓶，手动蒸馏5min，蒸馏2次。清洗完毕后，关闭冷凝水，关机。注意不要忘记关闭冷凝水。