主题：【第十七届原创】[第十七届原创]动物性食品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺的测定

动物性食品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺的测定

摘要：本文通过对以下涉及酰胺醇类兽药的检测标准：GB 31658.2-2021《食品安全国家标准 动物性食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱－串联质谱法》、 GB 31658.5-2021《食品安全国家标准 动物性食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱－串联质谱法》、GB 31656.16-2022《食品安全国家标准 水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量的测定 气相色谱法》、GB 31658.20-2022《食品安全国家标准 动物性食品中酰胺醇类药物及其代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》进行方法比较，下表梳理了这4个标准的标准号、目标物、前处理方式、检测仪器。



01： 想要做好方法优化，就要熟悉目标物的化学结构和化学性质。



从结构上看：

（1）含有苯环，可采用反相C₁₈色谱柱分离；

（2）按照极性大小顺序，氟苯尼考胺>甲砜霉素>氟苯尼考>氯霉素，因此在反相色谱柱上，这4个化合物的出峰时间则为氟苯尼考胺<甲砜霉素<氟苯尼考<氯霉素；

（3）含有-NH₂、-NH-等碱性基团，可采用MCX固相萃取柱进行净化。

02：标准能否整合？

答案显而易见，因为GB 31656.16-2022和GB 31658.20-2022这两个标准就是一次测了以上4种酰胺醇类兽药，因此这4种物质是可以合起来检测的。从检测目标物数量、前处理过程、检测仪器类型来看，GB 31658.20-2022更全、更简单。

03：哪种提取效果更好？

以上标准中，GB 31658.2-2021号标准采用乙腈提取，GB 31658.5-2021、GB 31656.16-2022、GB 31658.20-2022标准均采用的氨化乙酸乙酯，针对这两种溶剂作对比：



从上表中，我们无法确切地说哪一种溶剂更好，需要检测人员综合考虑检测基质及实验室效率等因素做出判断。如简单基质，可采用氨化乙酸乙酯提取。

04：哪种净化方式更佳，能否简化？

以上标准中，GB 31658.2-2021、GB 31658.5-2021、 GB 31656.16-2022 标准均采用SPE柱净化方式， GB 31658.20-2022标准则仅仅采用了液液萃取的方式。不论从成本、操作时间、操作难度都是GB 31658.20-2022标准更优。但液液萃取的净化效果是比不上SPE柱的，如果样品较复杂，或者采用GB 31658.20-2022（如鸡肉样品基质）标准效果不理想的时候，建议更换方法。

GB 31658.2-2021标准解读



标准解读



提取步骤改进总结



3、国标GB 31658.2-2021的离子对参数





总结：



GB 31658.5-2021标准解读







做好GB 31658.5 的要点：pH



pKa:酸性化合物解离常数（Ka）的负对数





离子交换柱的选择





阳离子交换柱：（离子交换：借助于固体离子交换剂中的离子与稀溶液中的离子进行交换，以达到提取或去除溶液中某些离子的目的）



净化：MCX固相萃取柱： 依次用甲醇2mL和水2mL活化。备用液过柱，用5%乙酸2mL淋洗，用10%氨甲醇 5mL洗脱。收集洗脱液，于40℃氮气吹干。用30%乙腈水溶液500μL溶解残余物，滤膜过滤，供超高效液相色谱-串联质谱测定。

注释：MCX阳离子交换柱其作用力为离子吸附，吸附的目标物为碱性化合物，上样时pH要低于2个单位目标物的pKa（10.4）（所以要加5%乙酸2mL调pH），洗脱时pH值要高于目标物2个单位的pKa。

实验谱图



GB 31658.5-2021《食品安全国家标准 动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的测定 液相色谱－串联质谱法》做好这个实验的要点：pH的控制；MCX阳离子交换作用机理；基质配标曲的方式这三方面来讲述了应用GB 31658.5-2021检测氟苯尼考及氟苯尼考胺的注意事项。

GB 31658.20-2022标准解读

标准中内标的影响：

（1）标准中甲砜霉素内标、氟苯尼考内标的离子对信息：





甲砜霉素、氟苯尼考目标物含有标准中相对应同位素内标的离子对信息



去除目标物对内标物的干扰



选择方案2效果更好

因此：要注意内标物的选择及内标浓度的选择