通常,色谱柱出厂时保存于100%乙腈中。将色谱柱更换至其它流动相体系之前,务必要确保流动相的兼容性。为避免流动相缓冲液在色谱柱或色谱系统中析出,使用五倍柱体积的水/有机溶剂混合溶液冲洗色谱柱,其中有机溶剂含量与所需缓冲盐流动相的有机溶剂含量相同或更低(例如,使用60%的甲醇水溶液冲洗色谱柱和系统,然后再更换为60%甲醇/40%缓冲液的流动相)。对于反相分离来说,完成平衡至少用10倍柱体积的流动相(参见下表中的色谱柱体积)。当反压达到恒定且色谱柱基线稳定时,可认为该柱达到完全平衡。
注意! 如果流动相中的添加剂(如,离子对试剂)浓度较低(<0.2%v/v),那么完成平衡可能需要100-200倍柱体积的流动相。此外,当流动相中含有甲酸盐(如,甲酸铵、甲酸等)时,平衡时间可能会延长。
色谱柱体积表(mL)