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主题：【求助】xbrige c18 长期做碱性改成酸性后，空白出了很多包和杂质，求教

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cafecat
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发表于：2016/02/24 18:51:48 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
现在使用的柱子是waters xbrige c18，使用的仪器是安捷伦1100。
这根柱子原来一直是做碱性流动相的，一般是10MM碳酸氢胺水和乙腈梯度洗脱，今天我用它来做酸性流动相，用的是 0.05％tfa的水和 0.05％tfa的乙腈，洗脱条件是0-12分钟，水从95％到5％，12-15分钟保持95%不变，有5分钟的平衡时间。
现在的现象是，进空白的时候，从10分钟以后就不停的鼓包和出峰，这些峰在214NM的吸收大概250，230NM大概150，254NM大概25。现在我基本上已经排除了仪器的问题，换了一根同样的柱子也是同样的问题（这个色谱柱以前也一直是做碱性条件的）。
现在的问题是，为什么会出现这样的问题那？是不是我经常做碱性条件导致了色谱柱内的物质残留，然后今天做酸性条件把杂质重冲出来了？还是由于柱子使用时间久了（3年，非天天使用），里面的物质会随着流动相跑出来被紫外检测到了？
这个论坛里大神比较多，是否有哪位大神能帮我一下
该帖子作者被版主 一片枫叶加 5积分， 2经验，加分理由：问题讨论
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一片枫叶
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2016/2/24 19:56:42 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
在碱性流动相介质中具有强保留的组分，在酸性介质中被强烈离子化而被高洗脱浓度的酸性乙腈洗脱出峰，在低波长这些具有紫外吸收的被洗脱的成分表现更明显，因而出现了楼主所描述的现象。
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cafecat
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2016/2/24 22:29:18 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 一片枫叶(v2960432) 发表:
在碱性流动相介质中具有强保留的组分，在酸性介质中被强烈离子化而被高洗脱浓度的酸性乙腈洗脱出峰，在低波长这些具有紫外吸收的被洗脱的成分表现更明显，因而出现了楼主所描述的现象。
谢谢版主大人，我还想知道是否还会有其他原因会导致这样的结果？那我想在现有的条件下能够顺利的完成分析条件，需要做哪些工作？
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夏天的雪
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2016/2/25 8:45:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
之前用碱性流动相时做完样品不冲柱子的吗？
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cafecat
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2016/2/25 8:50:28 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 夏天的雪(bingwang228) 发表:
之前用碱性流动相时做完样品不冲柱子的吗？


冲洗的啊，一般我们的条件是 0-30分钟 100%水  30-70分钟 100%水-0%水  70-100分钟 0%水  1ml/min流速
但是柱子时间已经比较久了 估计有3年左右使用时间了
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夏天的雪
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2016/2/25 16:45:45 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 cafecat(v3070956) 发表:
冲洗的啊，一般我们的条件是 0-30分钟 100%水  30-70分钟 100%水-0%水  70-100分钟 0%水  1ml/min流速
但是柱子时间已经比较久了 估计有3年左右使用时间了
先用两通走基线看是否会有杂质峰，然后再排除色谱柱
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cafecat
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2016/2/25 19:20:59 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 夏天的雪(bingwang228) 发表:
先用两通走基线看是否会有杂质峰，然后再排除色谱柱
已经走过了，没有什么问题的
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夏天的雪
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2016/2/26 8:43:41 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 cafecat(v3070956) 发表:
已经走过了，没有什么问题的
那就是色谱柱的问题了，用有机相多冲洗一段时间，如果是填料损坏估计就很难办了
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有水有渝
xky0230699
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2016/2/26 8:53:38 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
应该是碱性条件下的污染性强保留物质在酸性条件下被洗脱。另一个就是梯度变化的幅度不小，建议不进样走一下梯度看看结果。
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lsc362276
lsc362276
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2016/4/17 11:18:54 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
学习了谢谢
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seannoy
v2723283
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2016/4/18 10:13:39 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
又看到了100%水洗柱子....
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手机版： xbrige c18 长期做碱性改成酸性后，空白出了很多包和杂质，求教
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