主题:【讨论】我在使用酶标仪时遇到的问题

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闲鹤野云
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原文由 rlei 发表:
ELISA KIT 回温时间应该没有严格要求,一般使抗体和抗原达到最佳活性为好.厂家的使用说明书会标明这些(许多是15分钟以上,但不让超过一天),没的话就询问厂家吗.假如厂家连这一点都确定不了的话,你还敢用他的产品吗?

厂家讲将试剂和板子回温到室温,不要超过24小时.但为何每次的吸光度差那么大.不懂.
闲鹤野云
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原文由 lianlxh 发表:
应该做回温时间和吸光度的关系考察,找到变化稳定的时间或影响最小的时间才好,否则系统的误差太大了。没有用过,个人观点,不知对否?

谢谢,我也想过,这个应该是厂家早该做的.不过这个方法是新的,有不少地方需要研究.
家有宝贝儿
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原文由 ruojun 发表:
我们做了10次三聚氰胺的标准曲线检测,虽然是同一个批号的试剂盒,每次都不一样,OD(吸光度)相差很大,四个标准(0,20,100,500ppb)OD值从1.5-0.8;1.2-0.5; 0.9-0.3; 0.5-0.2变化.原因在哪里.是试剂盒的问题,还是什么问题.

差别真够大的啊!产品是否稳定要考虑,另外酶标仪的最佳测定值一般在0.1-1.0之间,如果能将线性控制在0.2-0.8之间是最好的,否则每次的系统误差将增大。
家有宝贝儿
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原文由 ruojun 发表:
原文由 rlei 发表:
ELISA KIT 回温时间应该没有严格要求,一般使抗体和抗原达到最佳活性为好.厂家的使用说明书会标明这些(许多是15分钟以上,但不让超过一天),没的话就询问厂家吗.假如厂家连这一点都确定不了的话,你还敢用他的产品吗?

厂家讲将试剂和板子回温到室温,不要超过24小时.但为何每次的吸光度差那么大.不懂.

不超过24小时?时间很长,不知道有没有封口,最好不要直接与空气接触。
闲鹤野云
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原文由 menghandna 发表:
不超过24小时?时间很长,不知道有没有封口,最好不要直接与空气接触。

试剂会接触空气的,但板井我都放在空气中了.时间从30分钟到3小时不等.错了,要封口呀?温度太低应该会影响抗原抗体吸附吧
tianru的爸爸
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原文由 menghandna 发表:
不超过24小时?时间很长,不知道有没有封口,最好不要直接与空气接触。


原文由 ruojun 发表:
试剂会接触空气的,但板井我都放在空气中了.时间从30分钟到3小时不等.错了,要封口呀?温度太低应该会影响抗原抗体吸附吧


1、温度低会影响抗原抗体反应的,一般是在37度反应一个固定时间,也有用室温(20度附近)反应一个固定时间(这些时间由自己掌握,固定就行)。
2、板子在不用的情况下,要密封起来,特别是长时间保存,不能让板子完全干透了,会影响将来的抗原抗体的结合。
3、最后酶显色也是很重要的,如果这时的条件不能一致,波动也会增加的;同样也是保持条件一定。
4、一直没有注意到板子回到室温的时间,没注意到它的干扰,只是注意反应的温度与时间:一般是把试剂回复到室温(用手感觉一下)再加试剂,然后再加样/试剂去反应(室温或37度保温)。
闲鹤野云
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原文由 lxdongzi2003 发表:
原文由 ruojun 发表:
试剂会接触空气的,但板井我都放在空气中了.时间从30分钟到3小时不等.错了,要封口呀?温度太低应该会影响抗原抗体吸附吧


1、温度低会影响抗原抗体反应的,一般是在37度反应一个固定时间,也有用室温(20度附近)反应一个固定时间(这些时间由自己掌握,固定就行)。
2、板子在不用的情况下,要密封起来,特别是长时间保存,不能让板子完全干透了,会影响将来的抗原抗体的结合。
3、最后酶显色也是很重要的,如果这时的条件不能一致,波动也会增加的;同样也是保持条件一定。
4、一直没有注意到板子回到室温的时间,没注意到它的干扰,只是注意反应的温度与时间:一般是把试剂回复到室温(用手感觉一下)再加试剂,然后再加样/试剂去反应(室温或37度保温)。
方法是有一个固定的反应时间为30分钟,洗板后再加入成色底物反应30分钟,最后终止反应比色读数.这些过程都一样,唯一的差异是在室温的回温时间和做实验的时间:上午或下午.难道上午或下午温度不同也会导致这么大的吸光度差异?
家有宝贝儿
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原文由 ruojun 发表:
方法是有一个固定的反应时间为30分钟,洗板后再加入成色底物反应30分钟,最后终止反应比色读数.这些过程都一样,唯一的差异是在室温的回温时间和做实验的时间:上午或下午.难道上午或下午温度不同也会导致这么大的吸光度差异?

如果连上午和下午都差这么多,这个实验的系统适用性就有问题。
没有其他公司的产品吗?如果有可以试试,不排除试剂盒本身的不稳定性。
闲鹤野云
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原文由 menghandna 发表:
如果连上午和下午都差这么多,这个实验的系统适用性就有问题。
没有其他公司的产品吗?如果有可以试试,不排除试剂盒本身的不稳定性。

我做个不同回温时间的实验,然后再交流.
一抹冰蓝
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我是外行,但有一个想法,检测环境的温湿度是否可能对检测结果造成影响,如果检测室有安装空调,并且样品的挥发性不大,挥发出的气味没有什么毒性,那么是否可以尝试先开空调在20度或25度,室内恒温半小时之后开始测试的一切工作?
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