主题：【第十届原创】【我爱学习】+液相色谱的校准过程

【我爱学习】+液相色谱的校准过程

    为了扩大做农残的项目，我们购买了液相色谱仪，主要是做蔬菜中氨基甲酸酯类，Agilent液相色谱仪1260，带两个检测器，VWD与FLD，有柱后衍生装置，仪器安装调试后要进行检定，我以为会是质检局上门检定，然后出据检定证书，可上门是H计量检测技术有限公司，填写的是校准记录。
    因为仪器是新的，安装调试一天时间，很多功能都不会用，由安装工程师来计算基线噪音、基线漂移、打印图谱，计算检出限等，校准人员计算流量等，通过校准学到不少东西，比较了检定与校准的区别，分享给大家。

图1：安捷伦液相1260带衍生装置

一、检定规程

    检定规程按液相色谱检定规程《JJG705-2014》进行。检定内容包括，基线噪音与基线漂移、定性重复性与定量重复性、泵流量的设定值误差与稳定性、梯度误差、柱箱温度设定值误差与柱箱温度稳定性、检测器性能等。那么校准做哪些内容呢？

图2：检定项目一览表

二、校准内容
1、 VWD紫外可见光检测器
1.1基线噪音与基线漂移
    选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，紫外检测器的波长设定为254nm，检测灵敏度调到最灵敏档。开机预热，待仪器稳定后记录基线30min，选取基线中噪声最大峰-峰高对应的信号值，按公式计算基线噪声，用检测器自身的物理量（AU）作单位表示，基线漂移用30min内基线集市起始点最大信号值（AU/30min）表示。

图3：软件上计算的基线噪音与基线漂移。

1.2最小检测浓度

图4：萘-甲醇1.00╳10^-7 g/mL的色谱图

1.3、定性定量重复性
    将仪器各部分联接好，选用C18色谱柱，用100%甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，紫外可见光检测器设定为254nm，灵敏度选择适中，基线稳定后由进样系统注入一定体积的1.0×10^-4g/mL萘-甲醇溶液标准物质；连续测量6次，记录色谱峰的保留时间和峰面积，按公式（9）计算相对标准偏差RSD₆。

图5：标准物质连续6次的图谱与RSD值。

2、 FLD荧光检测器
2.1基线噪音与基线漂移
    选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，检测灵敏度调到最灵敏档，激发波长设定为290nm，发射波长设定为330nm，仪器预热稳定后，记录基线30min，选取基线中噪声最大峰-峰高对应的信号值，按公式（7）计算基线噪声，用检测器自身的物理量（FU）做单位表示，基线漂移用30min内基线偏离起始点最大信号值（FU/30min）表示。

图6：FLD检测器的噪声与漂移。

2.2最小检测浓度

图7：萘-甲醇1.00╳10^-8 g/mL的色谱图

2.3、定性定量重复性
    将仪器各部分联接好，选用C18色谱柱，用100%甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，紫激发波长设定为290nm，发射波长设定为330nm，灵敏度选在中间档，基线稳定后由注入一定体积的1╳10^-5g/mL萘-甲醇标准溶液；连续测量6次，记录色谱峰的保留时间和峰面积，按公式（9）计算相对标准偏差RSD₆。

图8：萘-甲醇1.00╳10^-5 g/mL的色谱图

3、泵流量设定值误差Ss和流量稳定性S_R
    设定流量值1.0mL/min，启动仪器，压力稳定后，在流动相出口处用事先称重过的洁净容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集10min流出的流动相，在分析天平上称重，按公式（3）计算流量实测值Fm按公式（1）、公式（2）计算Ss和SR，每一设定流量，重复测量3次。

三、总结
    从上述校准过程可以看出，校准与检定有一定区别，百度上说，检定过程必须严格执行国家计量技术规范，带有强制性；检定结果要给出计量器具是否合格、能否投入使用的结论。而校准过程，用户可根据需要自主选择校准项目、校准单位和校准时间间隔。校准后只需给出初校准计量器具的示值与标准值之间的关系及可信度，不需要做出计量器具是否合格的结论。用户可自己选择计量器具能否投入使用。因此，计量校准比计量检定更灵活、应用也更广泛。
    液相色谱仪的校准没有做梯度误差，波长示值误差和重复性，线性范围，我询问了校准人员，为何不是检定而是校准，校准人员回答强检范围内的仪器是检定，非强检范围是校准，液相色谱不在强检范围内，所以是校准。校准做的内容比检定的内容少，这样对吗？