主题：【原创】调查大家固定生物活性物质的方法，及种类

电聚合，GOD

物理吸附，氧化还原蛋白质

MUA-->NHS/EDC-->antigen-->AE block-->Inj sample(antibody)

原文由 zhuliande 发表:
电聚合，GOD

看来是做导电聚合物电化学聚合的了，是修饰电极吗？

物理吸附，氧化还原蛋白质

请楼上讲详细些，特别是“氧化还原蛋白质”！

常见氧化还原蛋白质：血红蛋白，肌红蛋白，过氧化氢酶，辣根过氧化酶，细胞色素c，葡萄糖氧化酶等。

常见固定方法分物理包埋和共价键合固定。两种方法各有好处，根据需要而选择。

书上说的固定方法很多，但是大家用过的好像只有不多的几个，比如共价法和包埋法。

这个题目很好，大家都来讨论一下。从大的方面来说，主要分为这几种固定方法：


1、夹心法（sandwich）或隔离法（insulation）
将生物活性材料封闭在双层滤膜之间，形象地称为夹心法。
这种方法的特点是操作简单，不需要任何化学处理，固定生物量大，响应速度较快，重现性较好，尤其适用于微生物和组织膜制作。商品BOD传感器的微生物膜就是用这种方法制作的。

2、吸附法（absorption）
经非水溶性载体物理吸附或离子结合作用使生物敏感元件固定，称为吸附法。这种结合可能是氢键、范德华力或离子键等，也可能是多种键合形式共同发挥作用。
载体种类繁多，如活性炭、高岭土、羟基石灰石、铝粉、金、硅胶、玻璃、胶原、壳聚糖、磷酸钙凝胶、纤维素和离子交换体（如二乙氨乙基DEAE纤维素、DEAE葡聚糖以及各种树脂），碳纤维、硅片等。吸附的牢固程度与溶液的pH、离子强度、温度、溶剂性质和种类以及酶浓度有关。
吸附法主要用于制备酶和免疫膜，吸附过程一般不需要化学试剂，对蛋白质活性影响小。但蛋白质分子容易脱落，特别在环境条件改变。故常与其他固定方法结合使用，如吸附交联法。

3、共价键结合法（covalent binding）
使生物活性分子通过共价键与不溶性载体结合而固定的方法称共价键合法。载体包括无机载体和有机载体。有机载体如纤维素及其衍生物、葡聚糖、琼脂粉、骨胶原等，无机载体使用较少，主要有多孔玻璃、石墨等。
酶与载体共价键共有3种方式：1、与载体直接反应连接；2、通过同源双功能试剂与载体连接；3、通过异源双功能试剂与载体连接后再与载体反应连接。
共价键合法的特点是结合牢固，蛋白质分子不易脱落，载体不易被生物降解，使用寿命长。缺点是操作步骤较多，酶活性可能因发生化学修饰而降低，制备具有高活性的固定化酶比较困难。

4、交联法（cross-linking）
此法借助双功能试剂使蛋白质结合到惰性载体或蛋白质分子彼此交联成网状结构。
交联法广泛用于酶膜和免疫分子制备，操作简单，结合牢固，在酶源较困难时常常需要加入数倍于酶的惰性蛋白质作为基质。本法存在的问题是在进行固定化时需严格控制pH，一般在蛋白质的等电点附近操作，交联剂浓度也得小心调整。

5、凝胶包埋法（entrapment）
将酶分子或细胞包埋并固定在高分子聚合物三维空间网状结构基质中即为包埋法。
包埋法的特点是一般不产生化学修饰，对生物分子活性影响较小，膜的孔径和几何形状可任意控制，被包埋物不易渗漏，底物分子可以在膜中任意扩散，缺点是分子量大的底物在凝胶网格内扩散较困难，因此不适合大分子底物的测定。

6、微胶囊法（micro-encapsulation）
微胶囊法主要采用脂质体来包埋生物活性材料或指示分子。脂质体是由脂质双分子层组成的内部为水相的闭合囊泡。

不同基底材料，固定方法是有差别的。生物传感器和芯片用到的主要基底材料有：金属（金、铂），碳（有一定晶型的如玻碳、不定型的如石墨和自制丝网印刷电极），ITO玻璃，硅。

DNA 利用共价键合法固定。