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主题：【求助】有人做过GPO的蛋白电泳吗？

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biotrandglobal
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发表于：2007/06/08 16:29:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
悬赏金额：20积分 状态： 已解决
有人做过GPO的蛋白电泳吗？
今天做GPO（甘油磷酸氧化酶，MW：75KD）的还原型SDS-PAGE电泳，5%浓缩胶，12%的分离胶，理论上应该可以进行的，但什么都没有染出（其他蛋白都是正常的）。
推荐答案：家有宝贝儿回复于2007/06/13

没有染出蛋白，通常有以下几种可能：
1.蛋白的量太少，不知道楼主是用什么染色检测的。一般的考染最好有10ug。
2.电泳失败。如电泳时间太长，蛋白已经泳动到胶外。
3.样品不是溶液状态，可能会聚集在浓缩胶内，而不能正常进入分离胶。
4.检查PH值。要保证在该PH值下蛋白带负电荷。
补充答案：

tianru的爸爸回复于2007/07/04

不知道楼主做出来没有？
试过其它检测方法，如GPC之类的，样品能肯定没问题吗？总是怪怪的。

molybdenum回复于2007/06/13



我也不知道，是在资料库里面的，估计是人家做的，不是书

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2007/6/11 10:44:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 biotrandglobal 发表:
有人做过GPO的蛋白电泳吗？
今天做GPO（甘油磷酸氧化酶，MW：75KD）的还原型SDS-PAGE电泳，5%浓缩胶，12%的分离胶，理论上应该可以进行的，但什么都没有染出（其他蛋白都是正常的）。



帮忙找了一下资料，没有全文下载，
多肽物质分离与分析方法研究进展      0      286      2004-5-10       无全文
PCR扩增产物的电泳分析     0     618     2003-5-10     无全文
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2007/6/12 15:52:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 molybdenum 发表:帮忙找了一下资料，没有全文下载，
多肽物质分离与分析方法研究进展      0      286      2004-5-10       无全文
PCR扩增产物的电泳分析     0     618     2003-5-10     无全文
现代液相色谱进展

是三本书吗？
我在万方数据中没找到。
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家有宝贝儿
menghandna
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2007/6/13 13:45:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 biotrandglobal 发表:
有人做过GPO的蛋白电泳吗？
今天做GPO（甘油磷酸氧化酶，MW：75KD）的还原型SDS-PAGE电泳，5%浓缩胶，12%的分离胶，理论上应该可以进行的，但什么都没有染出（其他蛋白都是正常的）。

没有染出蛋白，通常有以下几种可能：
1.蛋白的量太少，不知道楼主是用什么染色检测的。一般的考染最好有10ug。
2.电泳失败。如电泳时间太长，蛋白已经泳动到胶外。
3.样品不是溶液状态，可能会聚集在浓缩胶内，而不能正常进入分离胶。
4.检查PH值。要保证在该PH值下蛋白带负电荷。
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biotrandglobal
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2007/6/13 15:30:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
刚做了醋酸纤维膜电泳，郁闷！
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Last edit by biotrandglobal
molybdenum
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2007/6/13 16:21:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是三本书吗？
我在万方数据中没找到。


我也不知道，是在资料库里面的，估计是人家做的，不是书
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tianru的爸爸
lxdongzi2003
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2007/6/20 19:00:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
GPO（甘油磷酸氧化酶，MW：75KD）的等电点是在5.0附近，用通常的SDS-PAGE应该没有问题，如果不行，试试ph为10的电泳（就用你在做的醋酸纤维膜，其只是分离精度上差些），也许可以。
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Last edit by lxdongzi2003
tianru的爸爸
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2007/7/4 14:58:00 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不知道楼主做出来没有？
试过其它检测方法，如GPC之类的，样品能肯定没问题吗？总是怪怪的。
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biotrandglobal
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2007/7/9 13:23:00 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢大家的帮忙，样品好像有点问题：
测活性是没有问题，就是电泳不行；重新制备了样品就解决问题了：测活性与电泳都没问题了。

到现在也不知道是为什么。不管它了。

谢谢大家。
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