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主题：【求助】如何在梯度洗脱中让人参皂苷出峰时间提前(已重新更新）

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txm
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发表于：2007/08/17 16:08:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
悬赏金额：38积分 状态： 已解决
2005版《中国药典》采用HPLC法测定了人参皂苷Rb3的含量，色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。以乙腈为流动相A，以0。2％磷酸溶液为流动相B，按下式进行梯度洗脱，检测波长为203nm。...

0～19分钟：流动相A（％）：30→35；流动相B（％）：70→65
19～21分钟：流动相A（％）：35→60；流动相B（％）：65→40
21～26分钟：流动相A（％）：50；流动相B（％）：50


做出来的图谱如下

  图一：人参皂苷Rb3    图二：供试品

请问该如何调整流动相比例或者采用什么办法使其出峰提前，而不至于出现在坡形上？？？











非常感谢大家的热心帮助，综合了大家的参考意见，并经过几次流动相比例的摸索调整，出峰时间已经提前了，但还是出现了连峰分离度不好的情况，请大家再看看在这段出峰时间如何再调整比例，使峰分离得更好，谢谢！！！
0～10分钟：流动相A（％）：30→35；流动相B（％）：70→65
10～21分钟：流动相A（％）：35→50；流动相B（％）：65→50
21～26分钟：流动相A（％）：50；流动相B（％）：50

推荐答案：miaoweili回复于2007/08/21
流动相极性调大一点
补充答案：

ljd5210回复于2007/08/29

用岛津的UFLC，超快速高效液相色谱仪

wubaicang2003回复于2007/08/18

把水重新蒸馏一下,再重配流动相；在正式做样之前最好不进样就走一个空梯度让系统充分饱和，设定梯度时最后让流动相配比回归到起始比例，你的问题应该能够解决

yaya91回复于2007/08/20

只要分离度达到1.5以上,就可以了.从图谱上看,样品的主成分峰峰形与对照品一致,条件是合适的。假如峰提前，会导致与相关杂质分不开。

Easy-Boy回复于2007/08/21


是啊，你可以用溶剂走一个空白，然后减去空白图谱，就能够获得基线较平整的图谱了。如果是Waters的仪器。

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2007/8/18 9:19:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
把水重新蒸馏一下,再重配流动相；在正式做样之前最好不进样就走一个空梯度让系统充分饱和，设定梯度时最后让流动相配比回归到起始比例，你的问题应该能够解决
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yaya91
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2007/8/20 11:57:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
只要分离度达到1.5以上,就可以了.从图谱上看,样品的主成分峰峰形与对照品一致,条件是合适的。假如峰提前，会导致与相关杂质分不开。
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tanggangfeng
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2007/8/20 23:13:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 txm 发表:
2005版《中国药典》采用HPLC法测定了人参皂苷Rb3的含量，色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。以乙腈为流动相A，以0。2％磷酸溶液为流动相B，按下式进行梯度洗脱，检测波长为203nm。...

0～19分钟：流动相A（％）：30→35；流动相B（％）：70→65
19～21分钟：流动相A（％）：35→60；流动相B（％）：65→50
21～26分钟：流动相A（％）：50；流动相B（％）：50


从图谱上看，应该还有优化可能。前面近20分钟基本没出峰。
可以尝试改下，如

0～10分钟：流动相A（％）：30→35；流动相B（％）：70→65
10～26分钟：流动相A（％）：35→60；流动相B（％）：65→40
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Last edit by tanggangfeng
Easy-Boy
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2007/8/21 8:13:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 yaya91 发表:
只要分离度达到1.5以上,就可以了.从图谱上看,样品的主成分峰峰形与对照品一致,条件是合适的。假如峰提前，会导致与相关杂质分不开。

是啊，你可以用溶剂走一个空白，然后减去空白图谱，就能够获得基线较平整的图谱了。如果是Waters的仪器。
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蒙哥麻利
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2007/8/21 14:16:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
样品杂质峰太多，分离效果也不太理想，建议换根小微米的柱子试试。
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miaoweili
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2007/8/21 21:52:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流动相极性调大一点
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txm
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2007/8/22 15:46:00 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
首先非常感谢大家对我提出的问题热心解答！
  我来总结一下：
1.把水重新蒸馏一下,再重配流动相；在正式做样之前最好不进样就走一个空梯度让系统充分饱和，设定梯度时最后让流动相配比回归到起始比例。
  这个方法我在任何梯度实验时都是这样做的，而且来回重复做了几次，换了两根进口柱子，结果没有什么改变。
2.只要分离度达到1.5以上,就可以了.
  分离度达到1.5，我们还要求峰走在一条直的基线上，而且主成分峰出现了一些锯齿峰，因图被缩小了，所以在图上看不出来。
3.由tanggangfeng提供的梯度洗脱比例，这个可以试一下，等待看结果如何再告知大家！！！
  最后还是非常感谢大家如此热心提供方法！！！！！
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case06
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2007/8/27 15:48:00 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
没做过啊，爱莫能助啊！
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no.Escape
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2007/8/28 14:13:00 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我来补充两句：
作梯度对流动相的要求比较高，尤其到后面，两种溶剂的比例发生变化，在203nm下，溶剂本身就会吸收光强，影响透光率。
另外一点，20分钟前没有明显的大峰，不代表就没有东东冲洗出来，某一些对紫外相应很弱的东东在里面，容积的吸收峰比他还高，就看不到峰了。
不晓得楼主做的什么样品。
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txm
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2007/8/29 17:58:00 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
由tanggangfeng提供的梯度洗脱比例，做出来结果也没什么变化，大家还有什么好的建议和方法吗
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手机版： 【求助】如何在梯度洗脱中让人参皂苷出峰时间提前(已重新更新）
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