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液相色谱（LC）

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主题：【求助】急！异硫氰酸苯酯（PITC）衍生测18氨基酸方法求助

浏览0 回复27 电梯直达

liujian132008

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发表于：2008/06/18 12:01:52 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

悬赏金额：20积分状态：已解决

急！
最近在做18氨基酸
查了一些资料，最后选择了异硫氰酸苯酯（PITC）衍生测18氨基酸
但遇到不少问题，希望得到大家帮助！
主要体现在丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸。。。。到脯氨酸不能很好的分离开，且峰形不好看理论板数不高，后面9个氨基酸又能很好的分离峰形好
不知道是那里出了问题？流动相还是衍生过程？
不知道你们能否提供一份成熟的方法，我好做下对比找到问题所在
在此感谢！
可发邮箱：liujian132008@yahoo.com.cn
也可以提供意见！大家一起讨论讨论。

推荐答案：色色猪回复于2008/06/19

邮件已发送，岛津柱子也可以做的，我试过，效果不错，流动相的PH不用调，你可以试试我的方法

补充答案：

东风恶回复于2008/08/18

能告诉我一下具体的操作步骤好吗？我的邮箱：luole1979@163.com.谢谢！！！

有水有渝回复于2008/08/19

呵呵,不好意思呀,我现在已经离开那家公司了,现在没做了,具体步骤不知道了,我有空帮你问一下以前的同事.

活到九十学到一百回复于2008/06/18

应该是流动相比例不合适造成的。楼主用的应该是梯度洗脱，将流动相比例或变化速度微调试一试，应该能达到比较好的效果。

nnsss回复于2008/06/18

考虑流动相和柱子的选择

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2008/6/18 12:07:50 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

应该是流动相比例不合适造成的。楼主用的应该是梯度洗脱，将流动相比例或变化速度微调试一试，应该能达到比较好的效果。

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nnsss

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2008/6/18 13:43:47 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

考虑流动相和柱子的选择

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niufen

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2008/6/18 13:50:25 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我们现在用２，４－－二硝基氟苯做衍生试剂，目前只检测一种酸，还不错的

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liujian132008

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2008/6/18 14:20:01 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 wangboxzzjs 发表:
应该是流动相比例不合适造成的。楼主用的应该是梯度洗脱，将流动相比例或变化速度微调试一试，应该能达到比较好的效果。

谢谢！
是梯度不是梯度18种那种得了
我想还是柱子的问题，用一般的C18柱还是不行，不知道你们都用那种柱子好用点？不要太贵了。
流动相比例我做了什么调整，效果不明显。

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liujian132008

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2008/6/18 14:27:00 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我也问了一些柱子的价格要四五千一根还说不一定做得出来
就是要我买什么氨基酸分析包，如果那样就没得意思了，什么都配好了照着一做就完事，量有少一下就用完了就好几千，那着得住。

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色色猪

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2008/6/18 16:39:36 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

其实也不难，我用的是agilent TC-C18的柱子，可以完全分开的，条件是：
流动相A:0.1mol/L乙酸钠+乙腈=97+3
B：乙腈+水=4+1
梯度：时间 A B
0 100 0
13 93 7
23 77 23
29 65 35
35 60 40
40 0 100
45 0 100
47 100 0
50 STOP

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