高速逆流色谱的一些新进展
1 与其他检测器的联用
目前HSCCC多采用紫外检测器进行在线检测,但HSCCC选用的有机溶剂及所分离的组分,有很多不适合用紫外检测,因而大家把目光投向了各种检测器与HSCCC联用技术上来。分流器技术的使用,解决了HSCCC与各种检测器联用的接口问题,目前已有HSCCC与质谱(MS)、红外(FTIR)、蒸发光散射(ELSD)联用的应用,从而为HSCCC的应用提供了一种新型***分离分析方法。Rinehart等报道了HSCCC与电喷雾质谱(ESIMS)联用技术,并评价了色谱分离和质谱分析的表现,认为制备型逆流色谱更适合于天然产物的分离分析。
近两年,国外有人成功的将HSCCC与ELSD联用,分离了7-甲氧基香豆素、橙皮素、莨菪亭、微形酮,效果非常好。总之,各种检测器的优点与HSCCC技术的良好地结合,为逆流色谱技术的应用开创了一个广阔的局面。
2 双向逆流色谱
双向逆流色谱(dual-mode countercurrent chromatography,简称DuCCC),即两相分别从螺旋管两端同时流入,又从相对应的端口同时流出,两相形成真正的逆向对流。与常规的HSCCC相比,DuCCC分离速度更快,分离效率更高,不必预测溶质的保留时间和分配系数,减少了溶剂选择的繁琐。该项技术可应用在蛋白分离。
3 利用HSCCC建立中药指纹图谱
中药质量可控是中药现代化的一个重要内容,中药以及复方因其复杂的成分和未明的作用机理,阻碍着中药现代化的进程。中药指纹图谱技术已成为研究中药有效成分及作用机理,控制中药质量,推动中药业走向世界的关键技术。HSCCC具有很好的分辨率和重现性,加上不存在固体载体吸咐,对样品的前处理要求不高或不用前处理,不存在分离过程丢失成分和成分变性的问题,因而可用于中药有效成分的定性或半定量分析,并整理出中药材的特征峰和指纹谱,制定标准图谱,用于中药的质量控制和测定。在高速逆流色谱指纹图谱研究方面,目前已对大黄、沙棘、何首乌等一些中药进行了研究。
对于高速逆流色谱,由于不需要固体支撑体,物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现,因而避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等,不仅使样品能够全部回收,回收的样品更能反映其本来的特性,特别适合于天然生物活性成分的分离。而且由于被分离物质与液态固定相之间能够充分接触,使得样品的制备量大大提高,是一种理想的制备分离手段。
关键点就在于溶剂系统的选择。
你好,根据我做高速逆流色谱的经验,采用正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水的体系,如果你降低正己烷的量,保留不会有所提高,可能发而会降低。固定相的保留率根上下两相的比重差有很大的关系,如果比重相差越大,上下相分相就会越快,保留一般就会很高,如果你降低正己烷的量的话,保留就会变得更差,分离效果也会变得更差。如果想增加保留而且分离效果变好的话,我想你应该根据你样品在上下相中的溶解度大小来做一个判断,如果样品在上相溶解的多,但是保留差,那你应该降低水的量,来增加下相的有机性,调整分配比。如果你样品在下相溶解的多,可以适当增加甲醇的量。我觉得中等极性的化合物正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水 还有氯仿:甲醇:水体系都能进行分离。
第二个问题,理论上K值得范围应该在0.6-1.5,但是根据实验,在0.3-2左右也是可以允许的,还有你用的是粗提物,不知道目标样品的含量如何?如果含量大于3%应该比较好分。