Cy 2.2 克喘素 用GC_MS确定牛血浆和组织中的残留水平1. 范围
克喘素是一种用于人体的,有效力的支气管扩张疾病药物,它也广泛分布在农牧场的动物群体中。克喘素通常是口服,也能够以双亲方式服用而起作用。口服方式通常是作为饲料添加剂来实现,其用量近似为3mg/kg饲料中。
下面的方法,描述了存在于样品中克喘素的检测和确认。
2. 应用范围
此方法用于测定牛血浆和组织(包括肝脏、肾脏、心脏、胸腺、脾脏、肌肉、脑组织、板油)中克喘素的残留量。
检测限是按照Girault和Fourtillan的报告(1990)中的定义而确定的,分别为5ng/L血浆和10ng/kg组织,但该报告中的定义与欧共体标准93/356(第5节)中的定义是有差别的。
3. 参考资料(略)
4. 定义
克喘素的含量是指被测定样品中克喘素的物质的量,根据以上对本方法所作的描述,它应该表述为 g/kg样品或 g/L样品。
5. 原理
本方法由5个部分组成。
⑴ 初级提取物的制备。
⑵ 用溶剂分配法对提取物进行净化和浓缩。
⑶ 衍生化反应生成perfluoroacyl衍生物。
⑷ GC-MS测定。
⑸ 结果计算和评价。
6. 实验材料
6.1 化学药品和试剂。
6.1.1 乙酸乙酯(Merck,art.no.9623)。
6.1.2 丙酮(Merck)。
6.1.3 二次蒸馏水。
6.1.4 甲醇(Merck,art.no.9623)。
6.1.5 2M氢氧化钠。
6.1.6 碳酸氢钠。
6.1.7 正己烷(Merck)。
6.1.8 0.2M硫酸(Merck)。
6.1.9 无水硫酸钠(Merck)。
6.1.10 氮气。
6.1.11 Pentafluoroperopionic anhydride(PFPA)(Pierce,Rockford,Ⅲ,USA)。
6.1.12 不含克喘素的人体血浆。
6.2 参考化合物。
6.2.1 克喘素,由意大利Parma市Chiesi Farmaceutici实验室提供。
6.2.2 同位素[ ]的示综标准物质作为内标物。
6.2.3 溶剂为甲醇浓度为0.1g/L的克喘素标准储备溶液。贮存于温度为 -20℃的黑暗中。
6.2.4 溶剂为甲醇浓度为0.1g/L的含有同位素[ ]的示踪原子的克喘素标准储备溶液。贮存于温度为 -20℃的黑暗中。
6.2.5 由上述标准储备溶液(6.2.3和6.2.4)用水稀释而制得的标准工作溶液,用金属铝箔将试剂瓶包裹起来,贮存于温度为+4℃的黑暗中。
6.3 溶液
6.3.1 2M氢氧化钠加碳酸氢钠组成的缓冲溶液,pH值调节到12。
6.3.2 Sorensen缓冲溶液,pH=7。
7. 仪器设备
全部玻璃器皿都用机械清洗刷洗过,然后放入铬酸(CrO3 - H2SO4)浴中过夜,最后用二次蒸馏水清洗。
7.1 机械清洗刷。
7.2 有顶部搅拌机传动的Polytron组织研磨机。
7.3 自动移液管。
7.4 冷冻离心机。
7.5 往复式振荡器。
7.6 离心管,10mL,带聚四氟乙烯螺冒。
7.7 配备吹氮气装置的水浴。
7.8 涡流振荡器。
7.9 配备水浴的旋转蒸发器。
7.10 玻璃衍生反应试管,10mL,具密封塞。
7.11 玻璃巴氏消毒毛细移液管。
7.12 具磨口塞玻璃试管(10mL和20mL)。
7.13 GC-MS联用仪。
7.13.1
气相色谱仪(HP 5985 B型)。
7.13.2 移动落针式进样系统。毛细色谱柱的一端伸进玻璃衬管中离进样针的针尖仅1mm。另一端经过一根1/16英寸的不锈钢传输管直接引入质谱仪的离子源中,离子源的温度为280℃。
7.13.3 质谱操作为选择性离子负离子化学解模式。
7.13.4 工作站。
7.13.5 打印机。
7.13.6 融化硅烷层毛细管
气相色谱柱,长25m 外经0.35mm, 内经0.22mm,涂层材料OV-1701,膜厚0.11 m。
8 样品和制样操作
注意:留意6.3.1节和国际标准化组织文件78/2-1982(E)以及由文件2052/Ⅵ/84-EN的附件Ⅱ导出的下列通则。
8.1 保证样品的天然性;即必须符合导则64/433/EEC中定义的内容,因此能够进行肉样中残留物的测定。排出的生物流体或粪便可以指定为做测定用的样品。
8.2 样品量;样品量要大到足以完成参考方法以及重复测定的要求。本方法测定β-激动素作一次测定时所要求的样品量为1mL的血浆或0.2g的组织。
8.3 样品采集和包装的方法,必须使实验室易于鉴别和使用。
8.4 样品的包装、贮存和运输的方法,必须保证样品的完整性,不能损害测试的结果。
做克喘素分析的样品,必须在低于-18℃的温度下贮存和输送。