主题:【讨论】反相可以检测变性蛋白么

浏览0 回复6 电梯直达
198321
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用0.1%三伏乙酸乙腈和水的反相液相可以检测变性蛋白和未变性蛋白的区别么?
  我试了一下,结果未发现两张图谱有什么区别,保留时间没有变化。
  变性是通过水煮和尿素变性2中方法分别处理的。
  大家有什么好的区分变性非变性蛋白的方法么,求教~~~~~~~
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有水有渝
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〓猪哥哥〓
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可以用反相lc来做。我看到有用100%的缓冲体系。

最好用一根耐水,250mm的柱子来做。
有水有渝
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那就要用亲水柱了,不知道效果怎么样,可以咨询一下色谱柱厂商,它们很多都做过这方面的验证,来检测色谱柱的性能。
dickwang2008
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变性蛋白能用液相来做吗?一般蛋白的分子量较大,如果进柱子会将其堵塞的。还望楼主多多讲解哈
tyys98
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原文由 198321(198321) 发表:
用0.1%三伏乙酸乙腈和水的反相液相可以检测变性蛋白和未变性蛋白的区别么?
  我试了一下,结果未发现两张图谱有什么区别,保留时间没有变化。
  变性是通过水煮和尿素变性2中方法分别处理的。
  大家有什么好的区分变性非变性蛋白的方法么,求教~~~~~~~

这条件大概不合适吧?即使没变性的也可能在这条件下变性。蛋白质是一种非常娇气的物质,高压、剪切力、有机溶剂、pH值、离子强度等等都很敏感,所以不建议用反相HPLC法,一般使用中压液相色谱,凝胶柱。
hujiangtao
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原文由 tyys98(tyys98) 发表:
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用0.1%三伏乙酸乙腈和水的反相液相可以检测变性蛋白和未变性蛋白的区别么?
  我试了一下,结果未发现两张图谱有什么区别,保留时间没有变化。
  变性是通过水煮和尿素变性2中方法分别处理的。
  大家有什么好的区分变性非变性蛋白的方法么,求教~~~~~~~

这条件大概不合适吧?即使没变性的也可能在这条件下变性。蛋白质是一种非常娇气的物质,高压、剪切力、有机溶剂、pH值、离子强度等等都很敏感,所以不建议用反相HPLC法,一般使用中压液相色谱,凝胶柱。

原来还有这么多说法 受教了
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