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主题：【转帖】使用缓冲盐时色谱柱维护的通用方法

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发表于：2010/07/07 10:49:03 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流动相中含有缓冲盐时，大的原则是：使用前要过渡，使用后要清洗（清洗包括两个步骤，一个步骤是用来清洗缓冲盐，另一个步骤是用来清洗强保留物质的），具体请按如下方式保养色谱柱：

1、使用前的过渡：

用乙腈：水＝10：90（如果是甲醇体系则用甲醇：水＝10：90）以1ml/min流速过渡30min（目的是防止缓冲盐在进入柱子时析出）；

2、一天分析完成后，即使用后的清洗：

1）用乙腈：水＝10：90（或甲醇：水＝10：90）以1ml/min流速反向冲洗45min（目的是洗去缓冲盐，防止缓冲盐在色谱柱内存留引起使用寿命下降）；

2）再用乙腈：水＝90：10（或甲醇：水＝90：10）1ml/min流速反向冲洗45min，（目的是洗去分析过程中积累的强保留物质，防止强保留物质在色谱柱内进一步积累，影响以后的分析，也防止强保留物质的积累导致的柱压升高），然后色谱柱保存在乙腈：水＝90：10（或甲醇：水＝90：10）中；

3、如果做完一种化合物，紧接着要做另外一种化合物，由于流动相等条件不同，则请先按步骤2清洗色谱柱，再使用色谱柱；要是接下来做的样品的流动相里也含有缓冲盐，也请在步骤2清洗过后再按步骤1的方式来过渡。

1）乙腈：水＝10：90或甲醇：水＝10：90容易长菌，温度越高越容易长菌，实验表明，在28度条件下保存至第5天时发现长菌，不宜多配。

2）如果您使用的色谱柱不能反向冲洗或使用，则无需反冲，正向冲洗本方法也适用，只是反冲的效果相对较好。
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2010/8/2 12:39:48 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
写的很好，学习了，把我之前的疑问差不多都解决了，写的很详细，考虑也很全面。谢谢分享。
还有个问题哦（我还没遇到过，就是想问问），就是如果已经做完样，结果忘了按步骤2冲洗，下次做样的时候才想起来，发现有问题，这时按照步骤2的方法冲洗，还行吗？还是要做进一步的处理？谢谢！
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pgtianmy
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2010/8/2 15:00:36 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不明白 柱子怎么能随时反向冲洗呢 这样柱效不就大大降低 柱子寿命大打折扣吗
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qiandodo
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2011/8/6 20:05:05 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱子不是都标有流向的吗？也可以反过来？
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yishengweiyao
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2011/8/8 22:44:36 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
反过来可以短时间冲洗。长时间是不好的。两端的筛板孔径是不一样的。有游离的键合相有可能给冲出来
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zhaohua8011
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2011/8/9 12:53:49 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不错的资料，值得学习呀！
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爱杰杰
zhchen1130
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2011/8/9 18:56:20 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
国家的标准操作规程上写的跟楼主有些出入，但意思是一样的
国家SOP上是：用完缓冲盐后先用低浓度的甲醇或乙腈冲洗（10%左右），再用较高浓度的甲醇或乙腈冲洗（40~50%），再用高浓度的甲醇或乙腈保存（80~90%）
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xiaowang268
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2011/8/15 13:32:53 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不需要每次都反冲吧，对柱子不好啊
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