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主题：【求助】HPLC流动相预混合和流动相等度运行保留时间不同，差别较大

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deqiongfeng
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发表于：2010/07/24 21:32:58 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
各位大侠：
        我用的是perkinelmer公司的HPLC---Series200仪器，最近HPLC老是出问题，不知道怎么回事，主要有以下症状和问题：1、在运行序列的时候，有时会出现自动脱机，也即软件控制不了仪器的运行。工程师过来看过，也不知道是哪里出了问题。2、用Perkinelmer公司提供的3厘米长的测试柱，所进样品为该公司购买的test mix std，一种运行方式为预混合70%甲醇水溶液，另一种运行方式是等度运行，甲醇和水为流动相，甲醇占70%。结果发现预混合和等度运行的保留时间不一样，差别很大。而且，两种运行方式都有较严重的脱尾。为什么会出现这样的情况？有一点需要说明，同一根测试柱有另一个客户刚用过就拿给我们公司，工程师说该柱子在那个客户那里运行效果很好，保留时间和测试要求的保留时间差不多，它的峰也很漂亮。现在我不知道是哪点出了问题，工程师说可能是水的问题，也可能试剂甲醇的问题。3、总之，我们的HPLC不知道是哪里出了问题，请各位高手指点迷津，小妹在此谢过各位大侠了。
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有水有渝
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2010/7/24 21:50:22 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是高压梯度吗？能不能上一下两测试图对比看一下。如果色谱柱没有问题，那么仪器有没有明显的死体积，用一个平常做的最稳定的样品检测一下，看看仪器有没有异常。脱机除了控制板，数据线和电脑系统，我也想不出还有哪里有问题。
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deqiongfeng
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2010/7/25 13:21:41 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
是高压梯度吗？能不能上一下两测试图对比看一下。如果色谱柱没有问题，那么仪器有没有明显的死体积，用一个平常做的最稳定的样品检测一下，看看仪器有没有异常。脱机除了控制板，数据线和电脑系统，我也想不出还有哪里有问题。


非常感谢你的指点，多谢！回头试试看。依你们的经验，是水和试剂的问题吗？
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有水有渝
xky0230699
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2010/7/25 15:59:02 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有问题只能一个个排除，如果怀疑水与试剂有问题，那就换一个没有问题的水和试剂在相同条件下检测一次就知道了。
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青橙
chengf3526
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2010/7/25 20:09:41 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
HPLC流动相预混合和流动相等度运行保留时间不同，差别较大
这是正常的，在没有问题的仪器上做，也会出现。
可以检测一下仪器的流量是否正常。
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1818
xyhdcm2002
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2010/7/26 9:03:36 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
梯度混合时容易产生汽泡,会影响出峰时间!而等度则不然!!
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21kgtan
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2010/7/26 9:30:21 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
需要注意的是你预混合70%甲醇水溶液的时候应该分别用量筒量取70ml甲醇和30ml水，再混合；如果你量取了70ml甲醇再往上添加水至100ml，由于分子间的相互运动实际的比例可能不足70%
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色色猪
huangqining
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2010/7/26 14:15:34 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
因为你预先混合的流动相跟等梯度的流动相所用的东西不是同一个，我认为这样没有可比性，你可以自己配制一个预先混合的70%甲醇的流动相，做过实验后再比较，这样就能看出是不是你仪器的混合器有问题了，另外一个就是水的问题，原来我就碰到过，水对流动相的影响还是很大的，我上次碰到这个问题的时候，把所有其他的问题都排查了一遍，最后才想到水的问题，希望你不要像我那样，做了很多无用功
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deqiongfeng
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2010/7/28 21:50:34 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 青橙(chengf3526) 发表:
HPLC流动相预混合和流动相等度运行保留时间不同，差别较大
这是正常的，在没有问题的仪器上做，也会出现。
可以检测一下仪器的流量是否正常。


流量方面，工程师来检查过，没问题。
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hexiupinggao
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2010/7/28 22:26:22 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我认为应该是两种混合方式不同造成的，在线混合后流动相瞬间产生大量的热，可能使得流动相比例与70%甲醇水溶液不符；而预混和后，虽然也放热，但基本上流动相经脱气和超声后，已经达到室温了。因此两者运行样品后保留时间会不同。
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