主题：【求助】单抗CE-SDS分析结果解读

如题，用CE-SDS方法分析单抗，做了一段时间，也有了一些数据，但不知道该怎样准确理解这些数据。

首先Becman提供的一个文献里（见附件），作者测了一个已知NG（non-glycosilation)含量为9%的IgG,分别在reduced和Non-reduced条件下测定。结果是，两个条件下测出的NG含量基本一致，接近理论值，并且重链和轻链的比例也是接近2.

而我现在做的那个抗体，在reduced条件下和在non-reduced条件下测得的NG含量差异较大，reduced条件下的要明显低于non-reduced的。并且重链和轻链的比值不是接近2，而是2.5。我用PNG酶切过之后，NG出峰位置含量明显增加。另外我还做了几个stressed的样品，比如双氧水氧化的，比较明显的是在Intact-mAb(non-reduced条件）和重链前（reduced)出现很大的峰。

下面是几个问题：

1. 理论上，reduced条件下测得的NG含量应该是和Non-reduced条件下测得的接近（同文献）还是说其实这是CASE BY CASE的？因为是和UV吸收有关，如果几个有紫外吸收的氨基酸在轻重链上的分布不均衡，比如在轻链上更多，那轻链的响应值就会比较高，这样轻重链的比值就不是简单的1:2了。而NG的含量在两个条件下也就不一定相关了。

2、双氧水处理之后产生了Mw不一样的峰，可能是什么东西，是破坏了什么键产生的？

3.为什么单抗的CE-SDS分析通常都做还原和非还原的条件，二者所得的数据是怎样互补的？

谢谢大家的答疑解惑，欢迎交流！

补充一个疑问，是关于还原和非还原条件的。还原条件用的是巯基乙醇，打开二硫键；非还原条件用的是250mM的碘乙酰胺。我经常在文献上看到是这么说的：还原时先用巯基乙醇打开二硫键，然后再加烷化剂碘乙酰胺保护已生成的巯基，避免重新生成二硫键。然后我就很纳闷，那为什么再做CE-SDS的时候，还原时用了巯基乙醇后不再加烷化剂保护巯基，而非还原的时候为什么要加碘乙酰胺，是要保护单抗中的游离巯基么（没理由啊？？）