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主题：【第六届原创】分析方法验证的可接受限度制定

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liufeilzu
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光谱发表于：2013/10/07 21:50:58 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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分析方法验证的可接受限度制定



    在进行分析方法验证的时候，一般会预先制定的可接受限度，在制定这些验证标准可接受限度的时候需要注意哪些问题呢？我们需要避免哪些“作茧自缚”的不切合实际的限度呢？首先我们从制定分析指标的接受限度联系说起。

        1各个验证项目之间的RSD有关联吗？

    以液相色谱分析为例，依次要验证的项目是进样精密度、溶液稳定性、重复性和中间精密度。当你设定进样精密度数据要求RSD为5%的时候，重复性验证的标准应该不小于5%。为什么呢？在这里不进行严格的统计证明，通俗的讲的任何一个处理步骤的加入都会引入误差，这些误差是传递和累积的。如：

    进样精密度RSD%=仪器检测和进样误差ε；

    溶液稳定性RSD%=仪器检测和进样误差ε+检测物溶液稳定误差ε；

    重复性误差RSD%=仪器检测和进样误差ε+检测物溶液稳定误差ε+称样误差ε；

      中间精密度误差RSD%=仪器检测和进样误差ε+检测物溶液稳定误差ε+称样误差ε+不同操作人员误差ε+不同检测器误差ε+…

      ……

    所以为了符合事实和验证要求，这些验证指标从理论上是逐渐增加的或者至少不变。再次强调一点，我想说的是制定这些指标的应该考虑他们的之间的误差传递情况，考虑验证项目之间的联系，明确验证实验的顺序，不是否定实际实验中真实数据重复性RSD小于进样精密度RSD的情况。统计分析从理论上是考虑的是误差逐渐增大的大多数情况（统计一直考虑大多数），现实情况可能会出现仪器分析带来的误差是正误差，而你称样误差是负误差这种很少见的特殊情况。

        2怎样确定进样精密度RSD%?

    接上节内容，在明白了验证项目的内在联系和接受标准的误差传递关系后，我们在想：怎样确定进样精密度RSD?其实进样精密度是针对色谱分析方法来说，对所有的分析方法。我们需要知道怎样确定第一个精密度。这第一个精密度简单的来说是量具精密度和仪器检定精密度。

    选择合适的量具是保证实验数据准确的前提。天平、移液管、容量瓶等量具是实验的第一步，它们的误差水平是实验误差的开始，一般来说，合适配套的量具使用过程可以控制分析实验（比如常见的滴定实验）的误差在0.3%，高于仪器分析的精密度。

    现代药物分析常用的分析手段是仪器分析。仪器检定精密度（仪器性能指标）是各个厂家争相向用户宣传的重要指标，最近的原创大赛很多帖子（在此声明：我不是在做广告）讲了气相色谱，液相色谱和离子色谱的检定过程，检定的指标既是仪器接受和仪器状态评估的重要依据，也是分析方法验证的第一步，在USP和EP中有明确的仪器验证要求，可以根据仪器检定过程确定验证项目的第一个精密度RSD。

    仪器检定的精密度是针对系统的，换用不同系统时候这些精密度是需要调整的。以液相色谱为例：紫外的线性和精密度最好（一般可以达到2%），荧光的线性范围较窄，而蒸发光散射检测器(ELSD)精密度达到5%就很吃力，建议设置为7%，我想这也是在欧美药典没有采用ELSD检测器原因之一。除了检测器，同一种仪器采用不同的分析过程也会影响精密度，采用内标法避免了进样过程和信号放大过程的随机误差，一般来说，方法进样精密度比外标法高，严格的气相色谱和LC-MS分析方案一般采用内标法。

        3不同数值的RSD有什么不同？

    不同数值是什么意思？先看下面两组数据：

数据1

51

45

47

50

48

51

数据2

251

245

247

250

248

251



    数据2是在数据1上加200形成的，两组数据的标准误差SD均为2.21，但是数据1的RSD为4.54%，数据2的RSD为0.89%。很多时候一个分析过程的SD是一定的，就是说信号因为系统的干扰变化是一定的。要想数据的变化更多的体现是分析物的变化就必须选择适当的数据输出值，这个数据输出值会影响RSD。

调节分析物的绝对含量(称取量、进样浓度体积等)会改变分析的数值。对于液相色谱,一般“调整峰高至满量程的三分之一或者二分之一”，对于滴定分析，20ml的滴定管，一般滴定体积在12-18ml比较合适。

如果有的时候输出数值不能调整的合适值怎么办？比如：在用色谱分析有关物质的时候，有关物质色谱峰面积非常小。这个时候你制定可接受的范围就要适当放大，一般来说，低于5个定量限峰高的色谱峰，RSD可以放宽到20%附近。

  系统科学的制定分析方法验证的可接受范围

  把上面三项大家常常忽略的内容理理，在明确我们的分析目的后，制定分析方法验证的可接受范围应该这样进行：






    最后别忘了更严格的可接受标准的制定和执行是由下面两个因素推动的：1 产品质量提高，质量稳定均一；2分析技术获得进步。产品本身和分析技术本身才是制定方法学验证的可接受标准的依据，而不是为了不切实际追求数据好看。
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2013/10/8 7:53:56 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可接受标准的制定和执行，最主要的因素还是产品质量的提升及分析技术的突破
该帖子作者被版主 xiaowang268加 2积分， 2经验，加分理由：参与奖励
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tianru的爸爸
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2013/10/8 15:25:35 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
产品本身的性质和分析技术本身才是制定方法学验证的可接受标准的依据。

——非常同意这种说法与观点。
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2013/10/9 18:22:07 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zhw19811005(zhw19811005) 发表:

可接受标准的制定和执行，最主要的因素还是产品质量的提升及分析技术的突破


说的很对，产品质量应该是第一位的
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2013/10/9 18:40:39 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 tianru的爸爸(lxdongzi2003) 发表:
产品本身的性质和分析技术本身才是制定方法学验证的可接受标准的依据。

——非常同意这种说法与观点。


当然也是最难的两个指标啊
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2013/10/9 18:41:00 Last edit by xiaowang268
hebe19841217
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2013/10/10 16:13:25 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请教楼主，对于液质联用方法的验证该如何制定方案呢？特别是涉及到要用到质谱定量的方法。
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wulin321
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2013/10/11 10:02:02 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个真不好确定，很多的误差是不是能控制或者减少
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2013/10/11 10:02:42 Last edit by wulin321
liufeilzu
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2013/10/11 10:25:32 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hebe19841217(hebe19841217) 发表:

请教楼主，对于液质联用方法的验证该如何制定方案呢？特别是涉及到要用到质谱定量的方法。


这个看你做什么

你是做农残环境还是做临床前药品分析

要是临床前分析，一般线性跨度大，不同的浓度回收率不一样，LLOQ回收率你可以做到回收率80——120%（外标法），质控样品漂移可以的做到正负15%的强度就好了，如果你检测条件比较好，质谱稳定，我们一般可以做到正负5%，你要做农残，在规定限附近指标就要做严格

所以主要看你目的，法规（是最低验证要求），和技术
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hebe19841217
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2013/10/14 10:43:37 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 liufeilzu(liufeilzu) 发表:
原文由 hebe19841217(hebe19841217) 发表:

请教楼主，对于液质联用方法的验证该如何制定方案呢？特别是涉及到要用到质谱定量的方法。


这个看你做什么

你是做农残环境还是做临床前药品分析

要是临床前分析，一般线性跨度大，不同的浓度回收率不一样，LLOQ回收率你可以做到回收率80——120%（外标法），质控样品漂移可以的做到正负15%的强度就好了，如果你检测条件比较好，质谱稳定，我们一般可以做到正负5%，你要做农残，在规定限附近指标就要做严格

所以主要看你目的，法规（是最低验证要求），和技术


多谢你详细的解答！

如果是做杂质分析就还好一点，但是我现在是需要做药物主成分的结构分析，偏研究性质，药典上暂无产品的质谱检测方面的内容，而且我们的药品是生物药品，结构非常复杂，质谱分析出来的峰可能达到成百上千个，也无标准品可用，这种情况进行方法学验证，我能想到的能做的项目好像只有重复性和耐变性（样品溶液稳定性什么的）了。线性、专属性、准确度这些感觉就无从下手，特别是专属性，个人认为质谱方法好像验证专属性没有什么意义吧，不知道理解是否正确，还请不吝赐教！
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zhoujin83
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2013/10/24 16:55:06 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是啊，我之前做方法验证，都是按欧美的标准做的，他们的可接受标准都分了好集中情况，比如LOQ，可接受标准就是RSD不大于50%,0.03~0.10%是20%，大于0.1是10%什么的。而目前按国内的方式来，可接受标准就是单一的不的过多少多少。觉得很纳闷，太不合理了。
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2013/10/24 16:55:26 Last edit by zhoujin83
liufeilzu
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2013/10/27 9:12:39 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zhoujin83(zhoujin83) 发表:

是啊，我之前做方法验证，都是按欧美的标准做的，他们的可接受标准都分了好集中情况，比如LOQ，可接受标准就是RSD不大于50%,0.03~0.10%是20%，大于0.1是10%什么的。而目前按国内的方式来，可接受标准就是单一的不的过多少多少。觉得很纳闷，太不合理了。


一般都是这样，我们习惯于看别人怎么做自己就怎样做，有的时候领导（不做实验的）为了省事和所谓的管理方便就在网上看一些东西，死扣条条框框，而网上的一般是lc-uv方法验证，而且有些还有出入
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