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1 方法依据本方法依据GB 5009.188-2003《蔬菜、水果中甲基托布津、多菌灵的测定》。
2 方法原理用甲醇自试样中提取出甲基托布津,在pH 1~2时,用二氯甲烷提取,甲基托布津经闭环反应转变为多菌灵,提纯后,用紫外分光光度法进行定量测定。多菌灵经提取后可直接测定吸光度而进行定量。
3 试剂3.1 甲醇
3.2 二氯甲烷
3.3 三氯甲烷
3.4 石油醚:沸程30℃~60℃
3.5 乙酸-乙酸铜溶液:称取2g乙酸铜,加100ml冰乙酸,稍加热溶解,用水稀释至200ml
3.6 盐酸(1+11):量取盐酸90ml,用水稀释至1000ml
3.7 氢氧化钠溶液(80g/L):称取8g氢氧化钠,加水溶解并稀释至100ml
3.8 氢氧化铵溶液(1+7):量取氨水10ml,加水稀释至80ml
3.9 氯化钠溶液(100g/L)
3.10 甲基托布津标准溶液:准确称取50.0mg甲基托布津,置于烧杯中,用三氯甲烷溶解并转移至50ml容量瓶中,稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1.0mg甲基托布津。
3.11 甲基托布津标准使用液:吸取10.0ml甲基托布津标准溶液置于100ml容量瓶中,加三氯甲烷稀释至刻度,此溶液每毫升相当于100.0ug甲基托布津。
3.12 多菌灵标准溶液:准确称取50.0mg多菌灵置于烧杯中,用盐酸(1+11)溶解移入50ml容量瓶中,并稀释至刻度,此溶液每毫升相当于1.0mg多菌灵。
3.13 多菌灵标准使用液:吸取10.0ml多菌灵标准溶液,置于100ml容量瓶中,加盐酸(1+11)稀释至刻度。此溶液每毫升相当于100.0ug多菌灵。
4仪器4.1 空气冷凝管
4.2 紫外分光光度计
5分析步骤5.1 标准曲线的制备
5.1.1甲基托布津标准曲线:吸取0、0.10、0.30、0.50ml甲基托布津标准使用液(相当于0、10、30、50ug甲基托布津),分别置于30ml圆底离心管中,挥干溶剂后,各加10ml乙酸-乙酸铜溶液及2粒玻璃珠,接上空气冷凝管,小火缓缓煮沸0.5h,取下,用20ml盐酸(1+11)从冷凝管顶端洗涤冷凝管和圆底离心管,并移入125ml分液漏斗中,用二氯甲烷提取二次,每次10ml,弃去二氯甲烷层,酸溶液中加25ml氢氧化钠溶液(80g/L)至pH6.0~6.5(pH试纸试),用二氯甲烷提取二次,每次20ml,合并二氯甲烷提取液,用10ml水洗涤一次,静置分层后,将二氯甲烷层分入另一个干的分液漏斗中,准确加入10ml盐酸(1+11),振摇5min,静置分层后,盐酸提取液用1cm石英比色杯,以盐酸(1+11)调节分光光度计零点,测读250nm~300nm的吸光度,以波长为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制吸收图谱。将图谱上260nm和290nm吸光度读数点连成直线,设直线上282nm的吸光度A,两者之差为ΔA(ΔA=A-A’,为校正吸光度)。再以校正吸光度为纵坐标,甲基托布津的含量为横坐标,绘制各甲基托布津标准点ΔA值的标准曲线。
5.1.2多菌灵标准曲线:吸取0、0.10、0.30、0.50ml多菌灵标准使用液(相当于0、10、30、50ug多菌灵),置于盛有20ml盐酸(1+11)的分液漏斗中,各用二氯甲烷提取二次,每次10ml,弃去二氯甲烷层,水溶液用氢氧化铵(1+7)中和到pH为6.0~6.5(pH试纸试),用二氯甲烷提取二次,每次20ml,提取液用10ml水洗涤一次,以下按甲基托布津自“将二氯甲烷层分入另一个干的分液漏斗中,准确加入10ml盐酸(1+11)”起依法操作,并绘制吸收图谱,计算出ΔA值后,绘制多菌灵的标准曲线。
5.2 试样的提取和分离
称取50.0g切碎、混匀的试样,加50ml甲醇振摇0.5h,用布什漏斗抽滤,容器和滤器用甲醇洗涤二次,每次15ml~20ml,抽干后,滤液移入烧杯中,抽滤瓶用约10ml水洗涤,洗液并入滤液内,在水浴上用空气流吹去部分甲醇后,移入分液漏斗中,加30ml氯化钠溶液(100g/L),用石油醚振摇提取二次,每次25ml,弃去石油醚,加盐酸酸化至pH为1~2(用pH试纸试),用二氯甲烷提取二次,每次25ml,合并二氯甲烷提取液,用25ml水洗涤一次分出二氯甲烷层留作甲基托布津测定用。水洗涤液合并入水层,留作多菌灵测定用。
5.3 甲基托布津的测定
二氯甲烷提取液自然挥干后,用10ml乙酸-乙酸铜溶液分次溶解残渣,并转入30ml圆底离心管中,加2粒玻璃珠,以下按5.1.1自“接上空气冷凝管”起依法操作,计算出试样的ΔA值,再与甲基托布津的标准曲线比较,计算试样中的含量。
5.4 多菌灵的测定
取5.2中留作多菌灵测定的水溶液,再氢氧化铵(1+7)中和至pH6.0~6.5,然后按5.1.2多菌灵标准曲线“用二氯甲烷提取二次”起依法操作,计算出试样中ΔA值,再与多菌灵标准曲线比较,计算试样中的含量。
6结果计算试样中甲基托布津、多菌灵含量按下式计算:
X=m′×1000/m×1000
式中:
X —试样中甲基托布津、多菌灵含量,单位为毫克每千克(mg/kg)
m′
—样品中甲基托布津、多菌灵含量,单位为微克(ug);
m —试样的质量,单位为克(g);
计算结果表示到两位有效数字。
7试验结果报告7.1校准曲线及线性范围:
工作 曲线 | 顺序号 | 1 | 2 | 3 | 4 |
质量( ug ) | 0.00 | 10.00 | 30.00 | 50.00 |
吸光值(A) | 0.000 | 0.035 | 0.093 | 0.163 |
回归方程 | y = 0.0032x +0.0004 |
相关系数 | 0.9984 |
7.2 方法的精密度
称取约50.0g样品,按照步骤5处理,平行制备9份样品,计算的含量并求出相对标准偏差,结果见下表所示。
顺序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
1 | 取样量(g) | 50.0176 | 50.0229 | 50.0010 | 50.0098 | 50.0076 | 50.0089 | 50.0006 | 50.0097 | 50.0011 |
吸光度(A) | 0.041 | 0.041 | 0.043 | 0.042 | 0.041 | 0.04 | 0.042 | 0.041 | 0.040 |
多菌灵含量(ug) | 14.06 | 14.06 | 14.69 | 14.38 | 14.06 | 13.75 | 14.38 | 14.06 | 13.75 |
浓度 mg/kg | 0.26 | 0.26 | 0.27 | 0.26 | 0.26 | 0.25 | 0.26 | 0.26 | 0.25 |
平均值 | 0.26 (S=0.0061) |
相对标准偏差
RSD(%) | 2.34 |
备注 | 结论:九个平行样品的相对标准偏差为2.34%,小于5%,符合要求。 |
7.3方法的中间精密度
随机选取2名实验人员,按照步骤5测定砷的含量,每个实验者平行测定3份样品,求出两者实验结果的相对标准偏差,结果见下表所示。
表2 中间精密度实验结果
实验者 | 多菌灵含量(mg/kg) | 平均结果(mg/kg) | 相对标准偏差(%) |
甲 | 0.26 | 0.26 | 2.99 |
0.25 |
0.26 |
乙 | 0.24 | 0.25 |
0.25 |
0.25 |
接受标准: 从精密度测试所得的6组数据中间精密度测试的相对标准偏差应小于5.0%。 |
7.4方法的准确度
分别向试样中加入一定量的多菌灵,使其砷的加标浓度为10ug/L的样品2ml、分别制备3份样品,按照步骤5处理,同时测定未加标样品硫脲含量,分别计算回收率、结果见下表所示。
样品 | 标准品 | 样品加标测量值 | 回收率(%) | 平均 回收率(%) |
浓度(mg/kg) | 取样量(g) | 多菌灵含量 (ug) M1 | 浓度(ug/ml) | 取样量(ml) | M2 (ug) | 吸光度(A) | 浓度 (mg/kg) | 质量 M |
0.252 | 50.0305 | 12.6 | 10 | 2 | 20 | 0.331 | 0.63 | 32.81 | 101.0 | 102.1 |
0.248 | 50.0725 | 12.4 | 10 | 2 | 20 | 0.340 | 0.64 | 33.13 | 103.6 |
0.256 | 50.0024 | 12.8 | 10 | 2 | 20 | 0.322 | 0.64 | 33.13 | 101.6 |
备注 | △%=(M- M1)*100/ M2 |
7.5 检出限
DL=0.02mg/kg
取20次平行测定空白样的结果,按IUPAC规定DL=KSb/50a
其中K=3
Sb:空白多次测得信号的标准偏差:0.0008
a: 校准曲线的斜率:0.0032
顺序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
吸光度(A) | 0.007 | 0.008 | 0.007 | 0.006 | 0.007 | 0.006 | 0.008 | 0.007 | 0.008 | 0.007 |
顺序号 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 |
吸光度(A) | 0.006 | 0.007 | 0.007 | 0.008 | 0.006 | 0.006 | 0.008 | 0.007 | 0.008 | 0.008 |
Sb | 0.0008 |
检出限(μg/g ) | 0.02 |
公式 | DL=f*K*Sb/50a ( K=3, Sb:空白信号的标准偏差,a:曲线斜率) |
备注 | DL=K*Sb/50a |
8 是否对方法偏离?
是□否■
9 结论我公司对
蔬菜、水果中甲基托布津、多菌灵的测定 的检测符合G
B 5009.188-2003要求。