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紫外可见分光光度计（UV）

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主题：【原创】容易忽视的问题--关于吸光度和浓度的切换问题？？？

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初学者&九点虎

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发表于：2008/07/21 22:12:02 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

今天突然发现，在测定样品时，吸光度和浓度在切换的过程中存在一点点小问题。（我用的是老仪器7230，类似721那样的仪器，带工作站的仪器估计没这个问题）
举个简单的例子说明，比如样品吸光度为0.425，当你切换成浓度时，其对应浓度为1.968，但我天做了一个，吸光度为0.425，浓度为2.012，后来我发现，2.012对应的吸光度为0.426，也就是说，在你切换的一瞬间，吸光度变化了0.001。
追究其原因，我觉得有一下三种可能：
1 仪器瞬间发生波动引起的吸光度变换
2 仪器的几下基线漂移引起的吸光度变化
3 溶液的性质发生了微小的变化
没准还有别的情况，欢迎大家一起讨论。

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2008/7/21 22:15:37 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

仪器测定的波动还是有的，可以测几次取平均值计算。

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小鸟飞翔

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2008/7/21 22:19:21 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

会不会是换算，小数位取舍的问题？

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初学者&九点虎

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2008/7/21 22:23:01 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 duliuhui 发表:
仪器测定的波动还是有的，可以测几次取平均值计算。

只能这样了，我们一般是做平行试验的

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初学者&九点虎

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2008/7/21 22:23:21 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 tonyding 发表:
会不会是换算，小数位取舍的问题？

不是，就是吸光度发生了变化

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夕阳

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2008/7/22 7:40:54 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 zhouyuhu 发表:
今天突然发现，在测定样品时，吸光度和浓度在切换的过程中存在一点点小问题。（我用的是老仪器7230，类似721那样的仪器，带工作站的仪器估计没这个问题）
举个简单的例子说明，比如样品吸光度为0.425，当你切换成浓度时，其对应浓度为1.968，但我天做了一个，吸光度为0.425，浓度为2.012，后来我发现，2.012对应的吸光度为0.426，也就是说，在你切换的一瞬间，吸光度变化了0.001。
追究其原因，我觉得有一下三种可能：
1 仪器瞬间发生波动引起的吸光度变换
2 仪器的几下基线漂移引起的吸光度变化
3 溶液的性质发生了微小的变化
没准还有别的情况，欢迎大家一起讨论。

这种现象就是紫外可见分光光度计的特点，也可以说是弱点。
根据朗伯比尔定律，当通过率变化1％时，吸光度相应变化0.0044Abs，即：
Abs=Log100/99=0.0044。
那么楼主测量的吸光值变化了0.001Abs，其透过率仅仅变化了0.3%。
对仪器而言不要说国产仪器，就是进口仪器，0.3%透过率的变化也是很正常的，所以说紫外可见分光光度计灵敏度不高的原因也就是在此。
顺便说一句，象楼主所测的样品，如果可能的话（有荧光物质）可以改用荧光分光光度计来测。否则要采用其他测试手段了，因为在紫外上测，说句行话，“动态范围”太窄了。

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Last edit by anping