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主题：【第十七届原创】反相高效液相色谱法测定食品中维生素A和E的实操技巧与故障排除

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发表于：2024/09/20 10:00:14 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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反相高效液相色谱法测定食品中维生素A和E的实操技巧与故障排除

一、操作要点

样品处理

首先，得把样品里的维生素A和E给提取出来。这一步通常要用到皂化处理，就是用碱把样品中的脂肪给分解掉，留下维生素A和E。然后，再用有机溶剂把这些维生素从样品中提取出来。

提取过程中要注意，使用的有机溶剂一定要纯净，不能含有杂质，否则会影响检测结果。

色谱条件设置

色谱柱一般用C18反相柱，这种柱子对维生素A和E的分离效果比较好。

流动相一般用甲醇和水，比如88:12的比例，流速控制在1.0ml/min左右。

检测波长一般选294nm，这个波长下维生素A和E的吸收效果最好。

进样量一般用10μL，进样前要确保样品溶液过滤干净，避免堵塞色谱柱。

数据分析

用高效液相色谱仪检测后，会得到一系列峰。根据峰的面积和保留时间，可以计算出样品中维生素A和E的含量。

这里可以用外标法或者内标法进行定量分析，具体方法根据实际情况选择。

二、故障排除

峰形不好

如果发现峰形拖尾或者分叉，可能是色谱柱污染了。可以尝试用强溶剂冲洗色谱柱，或者更换新的色谱柱。

还有可能是流动相比例不合适，可以微调一下甲醇和水的比例试试。

检测不到峰

首先检查样品是否提取完全，提取过程中有没有损失。

再检查检测器是否正常工作，波长设置是否正确。

最后检查进样针有没有堵塞，样品溶液是否过滤干净。

结果重复性差

检查仪器是否稳定，可以做几次空白试验看看结果是否一致。

再检查样品处理过程是否一致，每次提取和进样的量是否准确。

最后检查数据处理过程有没有误差，尽量使用自动化软件进行数据处理。

总之，反相高效液相色谱法测定食品中维生素A和E的含量虽然步骤繁琐，但只要掌握好操作要点，注意细节，就能得到准确可靠的结果。
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