背景

腺苷蛋氨酸（SAM）是存在于人体所有组织和体液中的一种生理活性分子。它作为甲基供体（转甲基作用）和生理性巯基化合物（如半胱氨酸、牛磺酸、谷胱甘肽和辅酶 A 等）的前体（转硫基作用）参不体内重要的生化反应。在肝内，通过使质膜磷脂甲基化而调节肝脏细胞膜的流动性，而且通过转硫基反应可以促进解毒过程中硫化产物的合成。只要肝内腺苷蛋氨酸的生物利用度在正常范围内，这些反应就有助于防止肝内胆汁郁积。

S-腺苷-L-蛋氨酸 ,在ATP的参与下甲硫氨酸经甲硫氨酸腺苷转移酶催化而成，在甲基转移酶的作用下，去掉一个甲基形成S-腺苷同型半胱氨酸(SAH),高效液相色谱（HPLC）适用于SAM的含量检测，依据其相应的色谱条件进样分析，进行含量测定。

实验材料与方法

1.样品预处理：

SAM标准曲线样品制备：将标准品32 mM SAM，用流动相逐级对半稀释成：0.25 mM , 0.5 mM , 1 mM , 2 mM ,4 mM (注意所有操作需在冰盒上操作，标准品SAM需涡旋仪混匀再使用，每个点稀释后也需混匀)；标准品稀释完需离心取上清20 μl至样品瓶的带内衬管中，标记为标准曲线样品。

待检样品制备：将待检样品先离心取上清，以预估样品的理论含量，用流动相将样品稀释至1 mM，需做平行样对比（注意所有操作需在冰盒上操作，稀释过程也需混匀）；取处理好的待检样品20 μl至样品瓶的带内衬管中，标记为样品。

标准样品：将标准品稀释至1 mM，同时做平行样品；取处理好的标准样品稀释液20μl至样品瓶的带内衬管中，标记为标准样品，验证方法和检测的可靠性。

2.仪器

液相色谱（waters）-型号：E2695-2489

台式离心机（卢湘仪）-型号：TG16A-WS

移液器（艾本德） -型号：20-200 μl

电子天平（梅特勒）-型号：Five Easy Plus

3.色谱分析条件

仪器系统：waters 2695-2489

色谱柱：ChromCore 120 C18, 5μm 4.6*250mm

检测波长：260 nm

柱温：26±3 ℃；

流速：1 ml/min；

进样体积：10 μl

流动相： A液：5%甲醇（含0.1%冰醋酸）

洗脱方式：等度洗脱

洗脱时间：20 min

采用等度洗脱（需依据不同厂家的色谱柱自行优化）

时间（min）	A%	B%	C%	D%	流速ml/min	最大压力限值psi
0	100	0	0	0	1.00	2500

实验图谱

0.25 mM SAM标准品（a）

0.5 mM SAM标准品（b）

SAM检测样品（c）

注：以上为SAM标准品（a）(b)和检测样品(c)色谱图

实验结论

将逐级稀释的标准品的各个含量，进样后得出其对应的峰面积，绘制成峰面积（y）与含量（x）标准曲线，如以下图为，SAM标准品（0.25 mM, 0.5 mM, 1 mM, 2 mM, 4 mM）峰面积与浓度含量的曲线图。如图所示，曲线 R2值应≥0.99，将SAM待测样品的峰面积带入到标准曲线里，得出相应的实际含量。