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主题：【求助】GPC检测不到信号

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viscotektegent
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2007/11/23 15:46:00 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
丙烯酰胺类好像做GPC都不太好做，还是场流分离FFF更稳妥、更可靠，呵呵，就是仪器太贵了。
柱子上吸附是较大可能。
另外，不一定就在THF中很好地溶解了。聚丙烯酰胺PAM就是用FFF最好做。我们有个朋友说自己合成的PAM分子量有2、3千万（是用脱机的光散射做的），用我们的AF4测试结果却只有2、3百万，后来觉得很可能是样品在水中没有完全溶解，而我们的方法是加入了盐来解蒂和，再用光散射、示差测试结果，效果很好，分布也很好，奉行不拖尾，谱图干净利落，外商还做了一个PDF文件呢。
即使是在有机体系中溶解，有时也需要加入盐来解蒂和！
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2007/11/23 21:57:00 12楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
非常感谢，你提到的FFF我去查查，我以前还不知道这样的方法*^ ^*
有一个疑问，如果分子缔合，那么测出来的样品分子量应该反而变大，为什么会反而变小了呢？

另外，纠正一下，我的样品是“N，N－二甲基丙烯酰胺”而不是“丙烯酰胺”。这两个聚合物还是差很多的，N，N－二甲基丙烯酰胺可以溶于大多数溶剂，所以（理论上）可以用通用的THF作为流动相走GPC，而丙烯酰胺仅能用水相。而且N，N－二甲基丙烯酰胺的缔合作用就要弱很多很多，因为没有了氢键。
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2007/11/25 11:38:00 13楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

蒂和使得样品成不规则小团状，而不是真正的稀溶液状态，所以在没有解除蒂和时测到的数据往往较大，而真正溶解后样品在稀溶解中是分子分散状态，也就是说，有蒂和/团聚现象时，即使用光散射，测到的结果也只是类似的大团状的数值，没什么意义。所以，做GPC，溶解最重要！否则什么检测器也是意义不大，光散射稍好些，有时能协助你看出溶解状况。
除了蒂和，有时也要加入些酸、碱等以控制pH值。
我们有个应用是做PNIPAM（聚N-异丙基丙烯酰胺），不知道与你的样品类似吗？用的是DMF做流动相/溶剂，还有专用柱子。
另外，溶解于大多数溶剂，并不等于就适合用这些溶剂作GPC测试！示差折光指数是一个问题，如果不合适，那么光散射也就一起没戏了。能否真正溶解又是一个问题。此外，别忘了温度。如果你坚持用THF，也可以升高温度测试一下。或者先做个溶解曲线，看一看你的样品在这个溶剂中哪个温度下溶剂最好，再选这个温度测试。
还有，别盲目相信文献。我记得我在网上说过，对了，是在“聚乳酸”那个帖子里，客户说文献就是用的THF，但是他的高度支化的聚乳酸，用THF怎么也不溶解，光散上的图全是钉子峰。后来改用三氯甲烷，就好了，数据很好，以前单用waters的RI时，峰形总拖尾很长，改用三氯甲烷后，拖尾也没有了。
对于自己合成的样品，更不能迷信文献了！因为你的东东可能跟文献上的有很大不同了，即使只是简单的支化。
场流分离就是用一个场来分离样品而不使用色谱柱分离，特点是先分离出来的是小分子，后出来的是大分子，与GPC正相反，而且不用过滤了，很适合自己合成的样品。更可以在GPC/HPLC上改造/并联FFF系统。
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2007/11/25 15:19:00 14楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
非常感谢~
  我坚持THF是因为我们的GPC是公用仪器，除非我证明有必要，否则管理员不会轻易地换溶剂的。
  N-异丙基丙烯酰胺我了解得不多，我仅知道它的氢键较丙烯酰胺要弱得多，但在水溶剂中32度以上会凝胶化，我们附近有人用水相做过它的GPC，必须要在32度以下才可以做(我们的常用柱温是35度)。
  N，N-二甲基丙烯酰胺应该没有凝胶化的问题， 不论是在水中还是在THF中(在水中的氢键已经足够弱了)，所以升温倒是应该会增加溶解度，这个我会尝试一下，只升温的话管理员应该是会同意的，只要不过THF沸点。
  另外，再问个问题。我看到你在聚乳酸那帖里说到的LS+RI+IV的检测器，对小角度LS，我想问一下是如何得到分子量的。我做过广角的静态LS，分子量是角度外推后用Hc/R=1/M + 2Ac进行浓度外推得到，但是在GPC柱里浓度是无法预知的，那么如何算出M？同理粘度检测是如何得出M的？
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2007/11/26 17:11:00 15楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

 
  小角LS与多角LS的计算公式基本一样，浓度也是事先乘量、配置样品溶液而计算出来的。
粘度计算分子量是用普适标定法（RI+IV），用一系列已知分子量和特性粘度的标样来做标准曲线，称为：普适校正曲线。再进样测试粘度值、保留时间、浓度等，然后在曲线上找点，再计算，大致是这样，比较麻烦，对于一般操作人员而言，有相当难度，主要是校正曲线做起来既麻烦又较难，费时费力，很容易出现误差。
如果是三检测器，就简单了：一次进样，LS算出分子量，IV测出特性粘度，进一步地都代入公式计算出a,K，以及流体力学体积等很多数据。同样，多角外推法LS也可以在线连接GPC，我们也有多角外推法的仪器。计算原理基本一样。只是小角法不外推、不修正，用小于10度的角度的散射光强近似地认为就是0度角的散射光强，再计算就行了。高分子物理教材上有相关内容，比较详细，也很容易找到。关键是这个小于10度的角的散射光强很难测到。小角法的优势是测定大分子量、超大分子量样品，精度、准确度较高，越大越好，1千万都没问题，此时与其他方法，如：质谱、核磁等，测试结果比较，平均偏差小于2%。远比其他角度测试这种超大分子要准得多。多角外推法也很好，但是由于角度多，所以样品池取光只能平面化，因此光源光强要大些，信/噪比稍低些。另外，角度多也造成必须用一个较大些的样品池以便容纳下多个取光角度，从而造成了死体积稍大些，不利于发挥GPC在线测试的优势：分子量计算随分布曲线一起。同时，如果与RI、IV等检测器的连接顺序不正确，还会影响示差折光检测器测试分子量分布的数据结果，使得分布变宽了。不过，分子量不太大时，也很准确的，还行。
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2007/11/26 17:51:00 16楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我突然想起一件事：去年青岛一所大学买的我们的仪器，做有机相和水相的合成纤维的分子量，结果也是进一个样品后等了将近一个小时，三个检测器只有粘度有信号，而且很弱，而做标样效果却很好，后来还是我们的工程师把客户样品的溶解曲线图拿来分析了一下，然后升温至50度，结果就好了，三个检测器数据都很好：峰形很对称，分布虽然有宽有窄，但是没有拖尾，信号都较强，基线平稳，后来进一步在升温至55度，效果更好，各个检测器信号更强些。
这与你的情况有些类似，所以，建议你试试升温吧，呵呵，不一定行，但是如果各个温度都试过了，仍然不行、没信号，那就不得不换流动相/溶剂体系了。这样也好，至少排除了一种情况。这也证明，摸索方法很困难啊。所以，有些样品的测试方法要花钱买，就可以理解了。
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2007/11/27 11:10:00 17楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可能我没有说清楚。
LS作为检测器，测量的是GPC柱中的高分子，能给出一个信号峰没有问题。但是这个时候，样品已经被流动相大量稀释了，怎么能还能计算出分子量呢？
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2007/11/27 11:11:00 18楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
非常感谢，我尝试着升温试试。
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2007/12/5 15:18:41 19楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
丙烯酰氨类的样品我们也做过一些，主要是用ＧＦＣ做的．看了以上论述，觉得很精彩！的确由于其氢键的影响使测量结果有很大的偏差，这点是没有疑问的！而解决其氢键影响的方法
　　　１　升高使用的柱子的温度．
　　　２　更换流动相不过　ＤＭＦ比ＴＨＦ更容易产生氢键的影响，所以ＴＨＦ应该是个不错的选择！
　　　所以我也认为升高柱子的使用温度可以使结果与实际差距减小！
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