主题：【求助】急求液相的整套学习过程

原文由 115586852 发表:
7楼的，我现在就 想知道，液相肯定用流动相吧，换句话说：在HPLC上面的方的几个瓶子，是不是同时用的还是说：就用两个瓶子就行了，一个是蒸馏水，一个甲醇等，是不是就用这两个啊

看你仪器的配置：等度仪器每次用一个，如果是梯度，几元梯度就同时用几个。

对阿，看你的分析条件了，等度洗脱就用1个好了，梯度洗脱需要几个就用几个。
当然等度洗脱用2个瓶子也行（前提是你的机器是带梯度控制的），一个装水，一个装甲醇，然后调好你的混合比例（比如1个80，1个20），一直就这么用就OK了。

http://www.xauat.edu.cn/ex/tsinghua/software/08/09/001/01/00001/8_ye/8_1_01.htm

很理论的资料，而且讲的不错。

楼上的资料不错啊，好好学习。
谢谢。

在回答问题之前，我觉得楼主应当对你目前急需解决的问题有针对性的进行提问。我认为你现在的主要问题是如何将工作开展起来，对一些使用和维护注意事项有一定了解，操作过程多加注意即可。对于仪器操作方面，我觉得楼主应当以仪器说明书为主，因为大家使用的仪器不可能都是一样的。液相色谱的好多经验是从实践过程总结出来的，而且有些东西不是一两句话就能解决的。比如楼主现在要测定食品中的防腐剂，首先仪器要能操作起来，然后对检测方法要有一定了解，在这些过程中有什么问题按顺序提出，逐步解决，一些与当前检测无关的理论性知识可以慢慢再学习。
1、清除泵内的空气，请问对泵内的脱气处理时如何进行的？
  先打开排空阀（排空阀打开后，流动相不经过色谱柱），将流速设到8--10ml/min,在这种流速下泵内的气泡可被直接排出，必要时用注射器进行抽打，然后将流速设到2ml/min，观察出液口，如果流动相均匀连续滴下，说明泵头气泡已排出；如果不均匀或时断时续，说明还有气泡，再重新进行。结束后，将阀关闭。
2、液相的色谱柱反相是什么意思啊？
  反相和正相的区别，前边好多人都讲过了，我就不重复了。楼主要测定食品类的和兽药残留，基本上都是反相，我做到现在都没用过正相的方法。
3、流动相由几个组成部分，是蒸馏水和HPLC专用甲醇两个吗？或者有更多的？我就想知道应该用几个，一次用几个啊，我看那么多瓶瓶，难道同时用两个甲醇啊，等等？
  流动相可以是单一的，也可以是几种溶剂混合的，比如甲醇、乙腈、四氢呋喃、水、缓冲盐等。液相的洗脱方式也有两种，一种是等度洗脱，一种是梯度洗脱。等度洗脱是指流动相或其比例不变，比如食品中苯甲酸的测定就是等度洗脱，用甲醇：0.02mol/L乙酸铵溶液=5：95，这时楼主可以将甲醇和0.02mol/L乙酸铵溶液按5：95混合到一起使用一个流动相，也可以将甲醇和0.02mol/L乙酸铵溶液分别放在两个容器中同时使用。梯度洗脱是指流动相或其比例在不断变化，比如食品中合成着色剂的测定，此时甲醇和0.02mol/L乙酸铵溶液就必须放在两个容器中使用。

给你一个最基础的：
现在的液相色谱仪一般都做成一个个单元组件，然后根据分析要求将各所需单元组件组合起来。最基本的组件是高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据系统（记录仪、积分仪或色谱工作站）。此外，还可根据需要配置流动相在线脱气装置、梯度洗脱装置、自动进样系统、柱后反应系统和全自动控制系统等。
液相色谱仪的工作过程：输液泵将流动相以稳定的流速（或压力）输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品导入,流动相将样品带入色谱柱,在色谱柱中各组分因在固定相中的分配系数或吸附力大小的不同而被分离，并依次随流动相流至检测器，检测到的信号送至数据系统记录、处理或保存。

楼上的意见很对，有些东西先作起来，再慢慢熟悉和提高。

谢谢  10楼的告解，十分感谢。

请问，要是等度的，是不是也要用水和甲醇啊，配的比例怎么配啊100克的为准，甲醇20，水8对吗，然后一个瓶子对吗？？
关键是如果用两个瓶子，应该怎么操作啊 。

我有的,但在笔记本电脑上,我有空传上来.

原文由 115586852 发表:
请问，要是等度的，是不是也要用水和甲醇啊，配的比例怎么配啊100克的为准，甲醇20，水8对吗，然后一个瓶子对吗？？
关键是如果用两个瓶子，应该怎么操作啊 。

具体用什么流动相看你的分析规程了，规定用什么就按照去配制。
一般比例按照体积比去配，比如20/80的甲醇/水溶液，量取800毫升的纯水，再量取200毫升的甲醇加入混合均匀，然后脱气（或根据需要过滤）就配成了1000毫升（甲醇：水=20：80）的流动相。