我们用欧洲药典的方法分析一个药品物质,发现主峰在2.5min就出峰了,主峰出峰太靠前,导致杂质分离不出来,杂质不主峰,被主峰掩盖,换了三台仪器都是这样。按照下面的线性梯度洗脱条件,主峰至少应该在4min以后出峰才对,而且国外的公司检测这个样品主峰的保留时间都在4.8min左右,很奇怪,请大家帮忙我分析一下这是什么原因,很头痛。具体分析条件如下:
色谱柱:4.6mm×0.1m (柱子是进口的,新买的)
固定相:色谱级的十八烷基硅烷键合硅胶, 粒径为5μm。
柱温:40℃
流动相A:7.8g/L的磷酸二氢钠溶液,用稀磷酸调pH 4.0。
流动相B:等量的流动相A和甲醇的混合物。
流速:1mL /min
检测器:紫外检测器,检测波长230nm。
进样量:20μL
流动相采用梯度洗涤,梯度洗涤方式如下表:
时间(分钟) 流动相A(体积比) 流动相B(体积比) 梯度洗涤方式
0-4 100 0
4-15 100→50 0→50 线性
15-18 50 50
18-24 50→100 50→0 线性
24-39 100 0