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液相色谱（LC）
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主题：【求助】谁能简明扼要地解释一下什么是色谱峰的纯度分析、纯度角、阈值、共同洗脱之类的？

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2008/8/25 13:21:50 21楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 sunlitj 发表:

6. 在一般的色谱分析中都要分析色谱峰的纯度吗？
这个不是一般的色谱分析，强制降解试验，就是找一个合适的条件使样品分解，然后通过DAD检测器，做三维图谱，看每一个峰在相应的波长处是单峰还是几个峰，这个应该是HPLC分析方法验证的一项内容。我们在做方法验证，有这样的分析，但是我也不是特别清楚。


再请教：二维图谱的两个坐标是保留时间和峰面积，那三维图谱的第三个坐标是什么呢？谢谢。
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2008/8/25 14:04:43 22楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 happyjyl 发表:
原文由 sunlitj 发表:

6. 在一般的色谱分析中都要分析色谱峰的纯度吗？
这个不是一般的色谱分析，强制降解试验，就是找一个合适的条件使样品分解，然后通过DAD检测器，做三维图谱，看每一个峰在相应的波长处是单峰还是几个峰，这个应该是HPLC分析方法验证的一项内容。我们在做方法验证，有这样的分析，但是我也不是特别清楚。


再请教：二维图谱的两个坐标是保留时间和峰面积，那三维图谱的第三个坐标是什么呢？谢谢。

给你张图三维图看看先
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2008/8/25 14:06:41 23楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
三维数据的第三个座标是wavelength
此外，第二个座标并不是面积，而是响应值。对于FLU检测器，3D数据的纵座标是荧光的响应吸收值，而对于绝大多数的HPLC的仪器，三维数据的纵座标是紫外检测器的吸收值，以AU或者V、mV表示。
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2008/8/25 14:22:16 24楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
6. 在一般的色谱分析中都要分析色谱峰的纯度吗？
在中华人民共和国药典二部附录XIX，药品质量标准分析方法验证指导原则中的“三 专属性”中提到“必要时可采用光电二极管阵列检测和质谱检测，进行峰纯度检查”。（附录173页。）
在USP25的2257页中也提到可以用PDA与MS进行峰的纯度测试。

实际工作中，我们在建立一个新的HPLC分析方法时，尤其是有关物质检查时，会引用PDA的数据作为旁证。
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baihezll
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2008/8/25 14:27:11 25楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 happyjyl 发表:
那三维图谱的第三个坐标是什么呢？谢谢。


借用一下这个三维图，谢谢！


在上面三维谱图中，可以进行二维谱图提取
1、如果固定一个时间点（4.00min），提取的谱图就是随着波长变化，吸收值的变化----光谱图。
  它的意义就是保留时间为4.00min的物质的光谱图。
  纯度角的概念或者说查看峰的纯度就是基于DAD检测器可以进行连续波长扫描，可以得到不同
  保留时间下对应物质的光谱图。一个峰有一定的峰宽（或者说时间跨度），以峰顶处的光谱为
  标准，软件自动比较其与色谱峰上每个采样点的光谱之间的差异。如果峰顶与色谱峰上其它点的
  光谱图没有明显差异，就认为这个峰纯。


2、固定波长（256nm），提取的就是随着时间变化吸收值的变化---色谱图。
  也就是我们平时最熟悉的液相色谱图。
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flyaway
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2008/8/25 14:27:45 26楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
峰纯度结果
纯度角：光谱一致性的一种衡量方法，即将积分峰上每个数据点的光谱与峰顶点光谱进行对照，计算出所有的“光谱对照角”，然后求其加权平均值。

“纯度角”的范围是从 0 到 90 度。值小（特别在小于阈值时）表明光谱均匀。值大表明不均匀程度较大。

纯度阈值：“纯度噪音角”与“溶剂角”之和。此值是可由共流出物、噪音、光测误差（高样品浓度）和/或溶剂单独引起的最大“纯度角”，而不是光谱形状的实际差别。

“纯度阈值”的范围是从 0 到 90 度。值很大表示测量的敏感度较低。“纯度噪音角”是整个积分峰内“噪音角”的加权平均值。

噪音角：“噪音角” 的大小与化合物的浓度成反比。通常，化合物的浓度越低，“噪音角”越大。“噪音角”越高，“纯度”测试对共流出分析物的存在的敏感度越低。

注：共流出物、噪音、溶剂成分或这些因素的组合都可导致光谱不均匀。

解释结果

在“结果”窗口中 ，将“纯度角”与“纯度阈值”进行对照，可以解释“峰纯度”结果。在解释“峰纯度”结果时，请注意以下注意事项：

“纯度角”和“纯度阈值”的值大小不能用于证明化学纯度。

要检测共流出物，杂质必需有 UV/Vis 吸光度、浓度大于检测极限，而且其光谱与主要峰组份不同。

如果噪音间隔包含的峰有 UV/Vis 吸光度，则会报告“阈值角度”值太大。结果，包含共流出物组份的一些峰将被报告为纯净的。
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2008/8/25 14:31:07 27楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1. purity angle译为纯度角是可行的。不应该有负值。具体情见26楼的贴
2. threshold此处译为阈值，或者纯度阈值。的确purity angle超过它就不合格。计算方式与注意事项26楼我已经说明了。

4. 表2中的homogeneous（暂且译为“色谱峰均一”），我们一般翻译为光谱一致性。
如果纯度角 < 噪音角，则在测量的噪音内光谱是均匀的。
5. 为什么要分析色谱峰的纯度呢？看峰形、计算分离度不行吗？
请见24楼的贴。
6. 在一般的色谱分析中都要分析色谱峰的纯度吗？
见24楼的贴。
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zying9
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2008/8/25 20:52:16 28楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 happyjyl 发表:
原文由 sunlitj 发表:

6. 在一般的色谱分析中都要分析色谱峰的纯度吗？
这个不是一般的色谱分析，强制降解试验，就是找一个合适的条件使样品分解，然后通过DAD检测器，做三维图谱，看每一个峰在相应的波长处是单峰还是几个峰，这个应该是HPLC分析方法验证的一项内容。我们在做方法验证，有这样的分析，但是我也不是特别清楚。


再请教：二维图谱的两个坐标是保留时间和峰面积，那三维图谱的第三个坐标是什么呢？谢谢。

第三个坐标是波长
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aiqiuqiu
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2008/8/25 21:24:41 29楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
引用：
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原文由 yangz 发表:
这是色谱分析中用到的一个参数，指的是所分离的色谱峰的纯度即此峰是单一成分还是混有其他成分，因为色谱就是一个分离净化过程，峰不纯则没有达到目的。计算纯度必须用到DAD检测器普通的VWD是不成的，其计算是基于DAD检测器所接收的光谱信号，具体的这里不好介绍要看一看DAD的说明了
--------------------------------------------------------------------------------


分享学习!万分感谢！
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2008/8/26 14:38:03 30楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
再次感谢各位的帮助，尤其是sunlitj、flyaway和baihezll的专业解释！为表感谢，每人转入20分，请查收。我在资料后面的结论里也看到了这样一句话：Purity angle of Verapmail HCl is less than the purity threshold in the entire degradation study chromatogram, which indicates that the peak is spectrally homogeneous.所以表格里的homogeneous我就参照flyaway的建议翻译成“色谱峰具有光谱一致性”。

我要回去好好消化一下，有问题再拿上来问。
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