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主题：【求助】土壤蛋白酶 茚三酮比色法

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lixiaohui012
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发表于：2008/08/27 10:56:52 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
悬赏金额：20积分 状态： 已解决
最近在做土壤蛋白酶，可是做了几次提出来的待测液体在比色的时候总是茶色，不知道是为什么？ 我是按照关松萌的土壤酶及其研究法上的茚三酮比色法做的，不知道问题到底出在哪里，希望大家能给我指点迷津，方便的话可以给我发邮件，我的邮箱是 xiaoyu589@163.com  谢谢啦！
推荐答案：liu999999回复于2008/08/28

那可能是蛋白酶含量太低了。
补充答案：

简单回复于2008/08/28



氨基酸在碱性溶液中能与茚三酮作用生成蓝紫色化合物，
可以考虑可能影响实验的步骤，
或者蛋白酶的含量太低了！增加土样量再测一测！！

岛津LC-20A回复于2008/09/28

请问一下，你们做蛋白酶的时候甘氨酸标准溶液稀释的是不是10倍？我稀释10倍沸水浴后怎么有的不变色啊？然后我稀释5倍，但是测出来的不成一天直线，真郁闷了，还有就是土样的大空白（就是不加土样的空白）怎么每次都比土样的高许多？那个小空白（就是有土样但是加水的空白）还可以，是不是哪里做错了，请教高手们帮我分析下哪里出错了,多谢了！~~~~~~~~~~~~

jiaoliwei回复于2008/11/26


 
你可以试一试用pH电极调一下溶液的pH值，调到显色的具体pH

该帖子作者被版主 简单加 2积分， 2经验，加分理由：鼓励新手！！
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2008/8/27 17:10:04 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
提取液有颜色很正常，身边人都出现了这种情况！采用活性炭吸附颜色！
再不影响实验的前提下，也可稀释提取液，减少该颜色的影响！
  注：不代表专家意见！
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lixiaohui012
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2008/8/27 22:10:45 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我做的提取液有颜色，用水浴加热后还是茶色。问题到底出在哪里啊？请各位帮忙啊！
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liu999999
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2008/8/28 8:55:56 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 lixiaohui012 发表:
我做的提取液有颜色，用水浴加热后还是茶色。问题到底出在哪里啊？请各位帮忙啊！

其中所含的有机质颜色，这对实验构成了麻烦。
可能没有太好的办法，只好降低吸液量了。
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lixiaohui012
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2008/8/28 9:02:29 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
多谢各位的帮忙。我已经减少吸液量了，但是水浴后仍是茶色啊。水浴后按照常理不应该是蓝色么？再次请教一下，你们用的是什么方法测定土壤蛋白酶的？我用的茚三酮比色法，一直没有做出结果。多谢多谢。
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2008/8/28 9:04:22 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 lixiaohui012 发表:
多谢各位的帮忙。我已经减少吸液量了，但是水浴后仍是茶色啊。水浴后按照常理不应该是蓝色么？再次请教一下，你们用的是什么方法测定土壤蛋白酶的？我用的茚三酮比色法，一直没有做出结果。多谢多谢。

你用的茚三酮已经失效了，重新换一瓶吧。
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lixiaohui012
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2008/8/28 9:08:43 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
多谢帮忙。但是应该不可能是茚三酮的问题，因为我标线做出来了啊。多谢
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2008/8/28 9:13:57 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 lixiaohui012 发表:
多谢帮忙。但是应该不可能是茚三酮的问题，因为我标线做出来了啊。多谢

那可能是蛋白酶含量太低了。
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2008/8/28 9:28:20 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是这样的原因么？我的土样的氮含量比较高，我还以为蛋白酶的含量会高呢。多谢你的解答。
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2008/8/28 10:31:13 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我说一下我操作的步骤，各位大侠们帮我找找问题到底出在哪里？
称取风干土4g，加1ml的甲苯15min后，再加入20ml的1%干酪素（干酪素是用PH
7.4的0.2M的磷酸盐缓冲液配制）在培养箱中30度下培养24h，培养结束后，再加入2ml 0.1N的硫酸和20%的硫酸钠溶液，再离心（6000转每分钟）15min，取上清液2ml，置于50ml的容量瓶中，加1ml茚三酮（2%的茚三酮，用丙酮配制），在沸水浴上水浴10min，将获的着色溶液用蒸馏水稀释至刻度。
  我的问题现在就是水浴以后，溶液变为茶色，不知道是什么原因。茚三酮应该没有问题，因为标线可以做出来，麻烦各位帮我想想，到底问题出在哪里，你们都是怎么做的啊？
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donglimin_12138
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2008/8/28 19:21:59 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 lixiaohui012 发表:
我说一下我操作的步骤，各位大侠们帮我找找问题到底出在哪里？
称取风干土4g，加1ml的甲苯15min后，再加入20ml的1%干酪素（干酪素是用PH
7.4的0.2M的磷酸盐缓冲液配制）在培养箱中30度下培养24h，培养结束后，再加入2ml 0.1N的硫酸和20%的硫酸钠溶液，再离心（6000转每分钟）15min，取上清液2ml，置于50ml的容量瓶中，加1ml茚三酮（2%的茚三酮，用丙酮配制），在沸水浴上水浴10min，将获的着色溶液用蒸馏水稀释至刻度。
  我的问题现在就是水浴以后，溶液变为茶色，不知道是什么原因。茚三酮应该没有问题，因为标线可以做出来，麻烦各位帮我想想，到底问题出在哪里，你们都是怎么做的啊？


氨基酸在碱性溶液中能与茚三酮作用生成蓝紫色化合物，
可以考虑可能影响实验的步骤，
或者蛋白酶的含量太低了！增加土样量再测一测！！
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