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液质联用（LCMS）

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主题：【已应助】【求助】药物代谢实验溶液加入顺序

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zjandzq0912

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发表于：2009/07/08 15:50:07 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

请问药物代谢实验中，IS，待测物，血浆，流动相的加入顺序是什么样的？有什么要求啊？
如果物质有吸附性，加入顺序是不是跟一般的顺序不同啊？

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2009/7/12 22:09:36 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

这里面应该也有很多做药物代谢的版友吧，大家帮他解决下困难吧，隔行如隔山确实就是实际。

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让海睡着

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2009/7/13 11:22:21 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

如果是提取方法的建立过程，待测物和内标的加入没有顺序上的要求，一般是用甲醇溶解后加入到血浆中的，或用其最大溶解度的溶液，一般用有机溶剂，如乙腈、甲醇。最后在氮气下吹干后用流动相溶解，然后离心上样即可。如果用来提取的物质有吸附性，则尽量找替代的其他提取物。实在找不到的，则应该重新考虑该方法的可行性，因为该提取物对待测物的吸附作用会造成待测物的损失，这需要经过比较，来确定该吸附性的大小，看是否小到可以忽略的程度。具体的步骤还需要看你的详细操作过程，简单的述说可能不能准确的找到你的问题的答案。

该帖子作者被版主 juju11加 3积分， 2经验，加分理由：热心应助

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让海睡着

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2009/7/13 11:25:27 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

对上面的回复我在做个补充，在你经过反复论证都找不到代替物且问题由于吸附物质的存在而得不到解决的时候，尽量在待测物相对浓度最低的时候加入吸附剂

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yangsophia

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2009/7/13 19:21:46 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 thxpc 发表:
对上面的回复我在做个补充，在你经过反复论证都找不到代替物且问题由于吸附物质的存在而得不到解决的时候，尽量在待测物相对浓度最低的时候加入吸附剂

烦请讲详细点，我也在学习中，对你说的不是很明白？！

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dickwang2008

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2009/7/14 8:45:10 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

另外在你加入待测物的时候，尽量减少有机溶剂的量，否则血浆性质可能会发生变化

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2009/7/14 8:55:26 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 dickwang2008 发表:
另外在你加入待测物的时候，尽量减少有机溶剂的量，否则血浆性质可能会发生变化

你的这个说法我不赞成，在外面做实验的时候很有必要加入过量的有机溶剂如甲醇等，作用是使其中的蛋白等物质变性有利于去除杂质，这样在过柱或者离心的时候不至于堵柱子或者是尽量的使溶液干净，干净的溶液才能安全上样呀~!
你所说的“血浆性质可能会发生变化”应该是指基质的影响吧？样品基质和空白基质用了同样的处理方法的。同前：干净的上样溶液的基质干扰才少

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2009/7/14 8:58:27 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 yangsophia 发表:
原文由 thxpc 发表:
对上面的回复我在做个补充，在你经过反复论证都找不到代替物且问题由于吸附物质的存在而得不到解决的时候，尽量在待测物相对浓度最低的时候加入吸附剂

烦请讲详细点，我也在学习中，对你说的不是很明白？！

比如你做了两次提取，液体合计是20毫升，然后你吹干定溶后液体是200微升，你觉得在这两个环节中的哪一个加入有吸附性物质会比较好呢？
我想你应该会选择在20毫升液体中加吧！！

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lrm

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2009/7/15 13:57:48 8楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

处理生物样品一般有3种方法，蛋白沉淀法，液液萃取法，固液萃取法。其中沉淀蛋白法用的最多，它简便，成本低，缺点是基质干扰大。
就沉淀蛋白法处理生物样品而言，一般过程是：生物血浆样品，加内标，加蛋白沉淀剂ACN/MeOH等（或者直接加含IS的ACN/MeOH溶液），沉淀离心，取上清加流动相复溶，进样。
若样品处理过程中化合物有吸附，可以更换其他材质的容器，比如若在塑料离心管有吸附，可以换成玻璃瓶处理样品。也可以加一些表面活性剂，比如吐温也可以改善吸附。

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dickwang2008

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2009/7/15 22:34:39 9楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 thxpc 发表:
原文由 dickwang2008 发表:
另外在你加入待测物的时候，尽量减少有机溶剂的量，否则血浆性质可能会发生变化

你的这个说法我不赞成，在外面做实验的时候很有必要加入过量的有机溶剂如甲醇等，作用是使其中的蛋白等物质变性有利于去除杂质，这样在过柱或者离心的时候不至于堵柱子或者是尽量的使溶液干净，干净的溶液才能安全上样呀~!
你所说的“血浆性质可能会发生变化”应该是指基质的影响吧？样品基质和空白基质用了同样的处理方法的。同前：干净的上样溶液的基质干扰才少

你的说法是不完全正确的。不管使用沉淀蛋白还是固相萃取，我们首先不能改变生物基质本身的性质，必须保持模拟生物样品和你的实际样品的性质一样。如果不同，那么配制出来的就不是模拟生物样品，如果往FDA申报或者投稿，很大比例的被拒签。

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