主题:【原创】太阳打西边出来拉

浏览0 回复27 电梯直达
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原文由 zlzlp2009 发表:
我那没有柱温箱,但之前测其他样品的时候保留时间变化不大!
再说温度影响有那么大嘛?


不同的样品温度的变化影响会很大.我做做过一个品种罗红霉素他的保留时间就随着温度变化而变化的
神话
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原文由 zlzlp2009 发表:
刚才老兄你说的PH,我每次测量时都用PH计矫正,应该问题不大.再者梯度的话,我把程序给你看下
时间  流速      A  B
0min  1ML/MIN  92  8
6MIN    1ML/MIN  92  8
7MIN    1ML/MIN  76 24
20MIN  1ML/MIN  STOP
柱子的话,我想检测,不知道怎么测量柱效呢?换柱子的话没条件呢!


关于梯度需要增加
1、用极性大的走5分钟;
2、改回初始比例;
3、平衡初始比例。

温度是有影响的,有柱温箱的话应该能控制住。

PH值是很重要的,你还是耐心的再看一下有问题没!

色谱柱看用多长时间了,看峰、柱压等。一般问题不大!

实验还可以灵活的自己调节下比例什么的。。。。
〓猪哥哥〓
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原文由 zlzlp2009 发表:
我不能不急阿,这个标样我已经跑了一礼拜拉,还没解决.
刚才老兄你说的PH,我每次测量时都用PH计矫正,应该问题不大.温度的话,我们只能用恒温箱控制,没有其他好的方法,条件有限.再者梯度的话,我把程序给你看下
时间  流速      A  B
0min  1ML/MIN  92  8
6MIN    1ML/MIN  92  8
7MIN    1ML/MIN  76 24
20MIN  1ML/MIN  STOP
关于其他的,机器,没什么大问题.今天他们用正相的测,测出来的效果不错.柱子的话,我想检测,不知道怎么测量柱效呢?换柱子的话没条件呢!

梯度变化很快,从6-7min之间。7min以后都是 76:24吗?建议再优化梯度。
david03052120
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时间  流速      A  B
0min  1ML/MIN  92  8
6MIN    1ML/MIN  92  8
7MIN    1ML/MIN  76 24
20MIN  1ML/MIN  STOP

你的梯度有问题,初始比例为92:8,而20min结束时为76:24,不能返回到厨师比例,使得你下一针进样时,是在76:24这个比例下进行的洗脱。
这就解释了咖啡因飘动大的原因
david03052120
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既然阿魏酸的保留时间为14min。建议你在15min后改变流动相条件为92:8

时间    流速    A  B
0min    1ML/MIN  92  8
6MIN    1ML/MIN  92  8
7MIN    1ML/MIN  76 24
15MIN  1ML/MIN  76 24
16MIN  1ML/MIN  92  8
20MIN  1ML/MIN  STOP
pandora98
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1. 先排除一下是不是仪器的问题,可以看看仪器压力稳定不稳定,几天之内有没有重复性,看看流速和流量有没有问题。每天都标一针溶剂,最好是甲苯,看一下甲苯峰重复性怎么样,如果甲苯能重复,则说明系统没有问题,可能是方法的问题
2.乙酸铵应该是比较稳定的,我们一直在用,没出现过你所讲的问题,每天不同仪器的保留时间重复性都很好。
3.梯度最好是再优化一下,把梯度结束以后的平衡时间延长几分钟再看
zlzlp2009
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原文由 david03052120 发表:

时间  流速      A  B
0min  1ML/MIN  92  8
6MIN    1ML/MIN  92  8
7MIN    1ML/MIN  76 24
20MIN  1ML/MIN  STOP

你的梯度有问题,初始比例为92:8,而20min结束时为76:24,不能返回到厨师比例,使得你下一针进样时,是在76:24这个比例下进行的洗脱。
这就解释了咖啡因飘动大的原因


请问一下,按照你的意思,我怎么设置呢?
对于这个我不是很熟悉!请求你的帮助.
我还想请问下,怎么我后面一段跑的面积也不成比例的?当然,保留时间也是存在比较大的差异.这个问题也与前面设置有关嘛?
zlzlp2009
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原文由 david03052120 发表:
既然阿魏酸的保留时间为14min。建议你在15min后改变流动相条件为92:8

时间    流速    A  B
0min    1ML/MIN  92  8
6MIN    1ML/MIN  92  8
7MIN    1ML/MIN  76 24
15MIN  1ML/MIN  76 24
16MIN  1ML/MIN  92  8
20MIN  1ML/MIN  STOP


梯度洗脱原始程序
这是梯度洗脱原始程序,有人按照这个程序已经做出来拉!
我这个程序与你这个区别在哪里呢?
高效液相色谱仪 岛津LC-10AT VP
两泵

还想请问下,你的15MIN那一步必须要嘛?
不可以直接进入16MIN那步嘛?
zlzlp2009
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每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理,使其恢复到初始的状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱,使固定相和初始流动相达到完全平衡!
请问下这段话的意思是让我每进一针样就冲半个小时,还是每天只要开始的时候冲洗半小时就行拉?
谢谢!
icefire2009
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