主题：【第二届网络原创作品大赛】看看我这款新HPLC

拆泵头的时候没有柱塞杆缩进一样拆啊，只不过有的话更方便

伍丰液相，很强的配置，不错的选择，使用情况再写点啦，不错的外观

工程师走后我整理的操作手册，请大家多指点。

高效液相操作手册
一、    高效液相原理及历史简介
    高效液相色谱（high performance liquid chromatography, HPLC）是指流动相为液体的技术。早期的液相色谱（经典液相色谱）是将小体积的试液注入色谱柱上部，然后用洗脱液（流动相）洗脱。这种经典色谱法，流动相依靠自身的重力穿过色谱柱，柱效差(固定相颗粒不能太小)，分离时间很长。
70年代初期发展起来的高效液相色谱法，克服了经典液相色谱法柱效低，分离时间很长的缺点。成为一种高效、快速的分离技术。高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9´107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。
主要机构组成如下：


二、流动相（及样品）预处理
A.溶剂介绍：
高效液相色谱的流动相分：有机相/无机相（水相）两种
1.    有机相：甲醇，乙腈，异丙醇（本文之后提到的各种试剂，除特别说明外均为  色谱级）等。使用前，一定要经过过滤装置过滤，以免杂质污染系统。
2.    无机相：UP级以上的纯水，石英亚氟双蒸水，娃哈哈纯净水，以上为当前经过多数大专院校及科研机构测试过的安全用水（本文之后提到的水，除特别说明外均为这三种）
3.对于纯水的保持不大于两天。
B.过滤装置
  包括真空抽气泵，布氏漏斗，微孔滤膜（Φ=50mm，孔径=0.45μm），收集瓶等部分组成。
这里注意：
1.    过滤膜的最大使用寿命为<5000ml,且为一次性使用。因此一次可多处理几瓶溶剂。
2.    滤膜分有机相专用，和水相专用两种，规格都一样，但切不可混用。
3.    如果是有机相和水相的混合用有机相滤膜。
C.超声波脱气
    由超声波清洗机完成。
    过滤完成的溶剂要经过超声波清洗机进行超声波处理20分钟，除去溶液中的微小气泡。如果不除气泡，那么这些微小气泡可能会在泵头内形成真空，磨损泵头。
使用超声波清洗机的时候切忌：不能使水槽内无水空转
D.样品溶液处理
    同溶剂一样，要经过过滤只是滤膜规格略小（Φ=13mm，孔径=0.45μm）。这种过滤膜的最大使用寿命为<10ml,且为一次性使用。
三、    主要操作流程（按操作先后排序）
1.    溶剂托盘操作
分ABCD四个通道，可以分别装载4种不同的溶剂。可产生的溶剂组合为：A+C,A+D,B+C,B+D四种，外加两瓶清洗液F1和F2（水+甲醇=1：1）。保证各瓶溶剂的液面最低处高于输液管的末端过滤器，以免形成气泡。
2.    高压输液泵A\B（由两个相同的活塞泵组成）
接受由溶剂托盘上几个溶剂瓶装在的不同溶剂，一次一个泵内只能容纳一种溶剂，根据电脑调节两泵转速调节溶液泵出量，从而达到改变溶液配比的效果（具体管路连接方式见主机标识）
注意：a.泵边上的in/out口试泵头清洗通道的出入口，不是溶剂通道，清洗剂：水+甲醇=1：1
          b.在液体进入泵头前不能开动活塞泵。要经过泵上的排液阀（单相旋钮阀）把空气排尽
          c.排液阀排出气体时，不要扭得太松，只要液体可以流动即可
3.    高压混合器
经过高压输液泵流出的两种溶液在其中混合
4.    手动进样阀
由一个六通阀构成，具体结构和功能，见色谱工作站配套软件
5.    色谱柱
色谱柱是高效液相色谱仪的分离核心部分，本机的色谱柱规格为：C18柱（以硅胶为填料，在硅胶颗粒上键合上了18烷基），颗粒大小≈5μm，Φ=4.6mm，L=250mm。色谱柱上有流向箭头，溶剂必须顺着箭头方向流动，流经色谱柱，否则有可能破坏柱内填充料的结构严正性。在安装（更换）色谱柱的时候，要先停止输液泵，首先要把输液管插入PeeK街头，然后拧紧柱子顶端螺栓。柱子放进柱温箱的时候，卡套要卡紧分离柱。
6.    检测器
检测器是对经过色谱柱分离后的样品进行检测的工具。内置一个样品池和一个参比池（以空气为参照）。以氘灯为光源。最佳检测区为紫外光区（210-430 nm）。本仪器所配氘灯的使用寿命为（1000小时）。
氘灯的开关要注意下面事项：
a.在主机打开泵开始工作后，经流动相充分平衡色谱柱30min左右开启。
b.氘灯开启后，在工作站检测器管理模块下方会有两行数字（分别是样品池和参比池的能量强度），这两行数字越接近说明检测器流通池产生的吸收越小。一般来说，相差《2倍。否则就说明样品池有污染，应进行清洗。
c.氘灯不要频繁开启和关闭，因为连续工作4小时对氘灯带来的消耗与开关一次氘灯相同。因此四小时以上不使用氘灯的情况下才有必要关闭氘灯。
7.  柱温箱：在室温+5℃条件下能够精确控温。
四、    进样
主要要求：
1.进样阀的操作要求：匀速，快速，不能在中间停留
2.进样针是专用的平头针，不可与气相色谱的尖头针混用
3.进样体积在排完气泡>定量环（本机为20μl）2～3倍
4.在load档进样，等转动进样阀至inject档后方可拔出进样针
五、日常清洗：
        每天做完样品后，要对整个系统（包括进样阀，色谱柱，泵头等）进行清洗，根据所接触的样品状态，大致可分为两种清洗方案：
1.    如果流动相是有机相，只包括：甲醇，乙腈，异丙醇，水等；清洗时，只需用：甲醇100%清洗40～60分钟即可关机。
2.    如果流动相是包含了缓冲盐类，如：弱酸，弱碱（强酸碱绝对禁止注入本机！），乙酸，乙酸铵，三氟乙酸，磷酸，氨水，三乙胺，磷酸盐等。清洗时，需要用：95%水+5%甲醇清洗80～100分钟，再用甲醇100%清洗40分钟方可关机。
3.    色谱柱清洗的时候，不推荐用纯水洗，加入5%甲醇才能保证湿润，否则色谱柱的碳链会发生塌陷，破坏柱子。
4.    特别注意，含有缓冲盐类（不论多少）的洗脱体系通过色谱后，切不可用甲醇直接清洗，否则甲醇容易与盐类作用，使盐类析出，堵塞系统，后果严重，切切！切切！
六、平时维护
1.色谱长时间不使用的情况下：
1周至少开机1次，用100%甲醇走基线30～40分钟
    2.连续使用时：
      每隔20～30天内，要用100%异丙醇清洗30分钟
七、系统状态判定
    在以100%甲醇为流动相时，1ml/min，A泵的压力应为4.2MPa左右。当在相同环境下压力上升至7～8Mpa时就应该清洗了；反之小于4.2MPa左右，就可能表示系统内存在漏液的情况。还应注意，泵的最高压力不能大于42MPa。
    泵头泵压增大后，如果是由于缓冲盐类使用较多，需要清洗时，应用：
    95%水+5%甲醇清洗1小时→100%甲醇清洗1小时→100%乙腈清洗1小时
    泵头泵压增大后，如果不是由于缓冲盐类造成的，需要清洗时，应用：
    100%甲醇清洗1小时→100%异丙醇→100%甲醇清洗1小时→100%乙腈清洗1小时
最后请注意：整个系统中甲醇的成分比较高的时候，整个系统产生霉变的可能性较低。因此可能的话在所有的溶液中添加一定量的甲醇可以防霉。最后整个系统应保存在甲醇中。
在更换流动相和色谱柱时应该先停止泵。

国产的做的挺不错，支持一下

今天更工程师要了一些我们仪器的结构图，方便日常的维护和了解仪器的性能。

做了一个样品请大家指点一下：

做了一下重复性，给大家看看效果怎样。

希望国产的液相越来越好.

好像也差不多
没有看出来有什么特别的优点！

不错，支持一个