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液相色谱（LC）
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主题：【求助】液相色谱柱选择

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liuyich08
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发表于：2009/11/14 00:19:12 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我有个多糖的混合液需要用液相色谱分离，请问用什么色谱柱和液相？谢谢
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2009/11/14 0:34:54 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
多糖的HPLC分析，用得较多用HPGPC测分子量及分子量分布。一般纯多糖紫外吸收较弱，多用RID或ELSD。
至于含量测定多用硫酸蒽酮比色或苯酚硫酸法。

多糖含量测定的方法主要分为以下两大类

一类是利用组成多糖的单糖的缩合反应而建立的方法：
如咔唑－硫酸法、蒽酮-硫酸法、苯酚-硫酸等比色的方法。该法测定时方法学干扰较大，但由于目前国内的实验条件，多糖的含量测定仍主要采用该方法。

另一类则是直接测定多糖本身而建立的方法：
如高效液相色谱法，但该法需要多糖的纯品。采用HPLC
测定糖，选择合适的检测器很重要：
（1）RI检测器具有稳定、易于操作、样品不被破坏等特点，但该法受温度和流动相组成的影响，不能使用梯度洗脱。
（2）uv-vis检测器：因为糖只在近紫外区190nm有吸收，流动相和样品中的杂质会影响多糖检测的灵敏度。若采用柱前衍生或柱后衍生反应，生成具有强紫外吸收的物质，可大大提高灵敏度。
（3)ELSD方法可解决上述问题，可与梯度洗脱相容，已有研究者应用HPLC-ELSD直接测定二糖海藻糖及D-木糖等单糖，但多糖的含量测定还未见报道。

多糖的纯度测定方法主要有：比旋度法、超离心法、高压电泳法、凝胶过滤法、纸层析法、冻融法、光谱扫描法
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