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主题：【求助】请教下梯度洗脱时基线的问题。

浏览0 回复7 电梯直达
dicmi
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发表于：2009/11/17 12:06:30 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
觉得很诡异的事情。。。

安捷伦1100的机器
梯度洗脱
前三分钟 H2O:ACN=50:50
后七分钟 H2O:ACN=5:95

第一批实验的图谱中基线是“下楼梯”的，即第一段在0mv，三分钟之后逐渐降到-200mv左右。都比较平稳
第二批实验的图谱中基线却突然变成了“上楼梯”的，第一段还是在0mv，三分钟之后主见升到20mv。也比较平稳

我第一个猜测是两个流动相给弄反了，因为两次实验之间我加过溶剂。但是重新使用新的流动相，确定无误后，基线仍然是上楼梯的。而且我观察“上楼梯”的图谱的pressure 变化，是下降的过程，应该是对的吧？（ACN多，压力小）

请问下大家这么诡异的事情，有什么可能的原因呢？
从理论上说，基线应该是上楼梯的还是下楼梯的呢？

多谢多谢
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muziying114
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2009/11/17 14:01:05 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
乙腈越多，洗脱能力越强，流动性越强，柱压越低，这是没有问题的。

一、甲醇和乙腈在200nm左右都有一定紫外吸收，梯度洗脱基线都会有一定漂移，特别在低波长下。如果您的物质有多个吸收峰，在300－400nm处还有吸收峰，且强度不太弱的话，选择此波长内定量较好。

二、梯度洗脱中，有机相增加，基线往往上漂较多（个人观点），但无论怎样，两次漂移的方向应该一致，所以得确认下：1.梯度洗脱完毕后，下一次进样前的平衡时间是否一致，如每次平衡的时间不一样，对基线走向和波动大小都有影响；2.管路是否进气泡，等度条件下观察下压力变化情况。

三、怕流动相配错，带个样看看保留时间就行，不用重配。
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有水有渝
xky0230699
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2009/11/17 20:48:45 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我认为应该是乙腈增加基线上漂，做过的含乙腈的梯度都是这个样子的。
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dicmi
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2009/11/18 2:09:45 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这么说的话，看来之前做的下降的基线原来都是不对的，可是怎么会出现这样的情况呢？有点奇怪。

另外回复muziying114 的建议：
1）平衡时间都是一致的，用的是自动进样器
2）流动相我做过脱气，管路我也purge过，我们还有个degas的装置，等度条件下，压力是平稳的



谢谢muziying114 和 xky0230699
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dicmi
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2009/11/18 2:24:15 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这么说的话，看来之前做的下降的基线原来都是不对的，可是怎么会出现这样的情况呢？有点奇怪。

另外回复muziying114 的建议：
1）平衡时间都是一致的，用的是自动进样器
2）流动相我做过脱气，管路我也purge过，我们还有个degas的装置，等度条件下，压力是平稳的



谢谢muziying114 和 xky0230699
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muziying114
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2009/11/18 11:17:13 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 dicmi(dicmi) 发表:
这么说的话，看来之前做的下降的基线原来都是不对的，可是怎么会出现这样的情况呢？有点奇怪。

另外回复muziying114 的建议：
1）平衡时间都是一致的，用的是自动进样器
2）流动相我做过脱气，管路我也purge过，我们还有个degas的装置，等度条件下，压力是平稳的



谢谢muziying114 和 xky0230699



基线改变后，目标物的保留时间和响应有变化吗？
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dicmi
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2009/11/18 12:09:22 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我是用来测DEHP和BBP的

基线改变后，两个响应峰不仅响应值变的异常的低，而且保留时间都不一样了。
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muziying114
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2009/11/18 14:34:48 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问题的关键不是基线漂移，而是由某种原因引起，导致了信号强度和保留时间都发生了改变，同时基线也相应的变化了。
试试看：
一、超声清洗下水相的滤头，水相滤头脏时保留时间会提前，顺便确认下在线过滤器和单向阀有没有问题。（您的保留时间是提前吗？）

二、确认下有没有哪里漏液。
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