【讨论】电泳里溶解样品时一定要与缓冲液浓度、PH值一定要相同吗？

cpudaxiao

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2009/12/7 23:10:31 11楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 nkmacromer(nkmacromer) 发表:
这个问题我一直在求解，我的样品是用甲醇溶解的，缓冲液是磷酸缓冲液，ph2.5，我多次尝试用甲醇溶解和用缓冲液溶解后进样比较好像没有差别，看国外的文献基本上都是缓冲液溶解后进样，希望大牛帮忙详细解释解释。

原因很简单，你的甲醇含量低，不至于形成“甲醇的流体塞子（plug）”，不知道能不能理解。

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chen456

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2009/12/9 16:36:28 12楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 sunpengwjh(sunpengwjh) 发表:
最好是相同的，否则会出现平台峰！楼主用的是一样的么？

平台峰是什么样的峰？怎么定义？

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chen456

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2009/12/9 16:38:37 13楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 cpudaxiao(cpudaxiao) 发表:
原文由 viernes(viernes) 发表:

原则上只要溶解样品的溶液的性质和buffer性质差别不大就好了，主要是为了避免两种情况：1，样品一旦移入到缓冲条带就析出；2.样品不能从溶解用溶液条带里迁移出来。

有什么具体例子么例如什么样品用了什么溶液在什么缓冲液里跑
就跑不出来了呢
谁有实例拿出来晒晒
大家好学习下

例子蛮多的，比如说磷酸盐遇到醇性缓冲，或是硼砂遇到乙腈都很容易析出的。

如果在样品处理过程中加入乙腈，而缓冲液就是硼砂缓冲液，这样是不是就不能进行分析了？

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ID：wangsl911

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2009/12/11 14:13:34 14楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

毛细管电泳对样品溶液的理想要求不但要求溶解样品时使用与缓冲液浓度、PH值相同，而且还应该是样品的浓度尽量低。这种要求的原因是为了保证分离体系的稳定性和高度重现性。因为只有这样不论样品迁移到哪里样品的溶解状态不变，样品带电荷状态不变，其周围溶液的离子强度保持稳定，同时高压电场在整个毛细管中分部均匀。
如果使用不同的浓度、pH溶液，迁移中样品带电状态会改变从而影响电泳，离子强度改变影响电渗流，电场分布是不均匀的也就是局部电场强度不同影响全部电泳参数，这些影响都放在一切，想想它会有多复杂。所以使用运行缓冲溶液的样品一般讲结果的重现性和稳定性都很好，故能使用应尽可能使用。
一般讲样品使用和运行缓冲溶液不同状态的溶液都会影响峰形，会形成前伸峰或拖尾峰，也就是说影响峰的不对称状况。
但在一些电泳特殊技术中往往故意不遵循这一原则，常见使用比运行缓冲溶液浓度低的溶液溶解样品，最常见用水。这是为了进样时在进样区带上获得一个高的电压分配(因为电阻大了嘛)，让样品快速迁移，进入缓冲溶液区后场强下降，迁移速度减慢，从而获得了样品在线浓集的效果，样品区带减小，得到的峰尖锐强度好。但这些技术都要考虑样品是否析出，会否变形，电荷变化强度等多种问题，不是普遍适宜的方法。

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